本文關(guān)鍵詞：Pax6對大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的分化誘導(dǎo)作用及其應(yīng)用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《成都醫(yī)學(xué)院》 2015年

Pax6對大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的分化誘導(dǎo)作用及其應(yīng)用研究

羅永慧  

【摘要】：目的脂肪間充質(zhì)干細胞是多能成體干細胞,具有多向分化的潛能。本實驗用Pax6-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染脂肪間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)其向角膜上皮樣細胞分化,以期為組織工程角膜提供有效的角膜上皮細胞來源,用于治療角膜損傷。方法使用酶消化-組織塊培養(yǎng)的方法從SD(Sprague Dawley,SD)大鼠腹股溝皮下脂肪中提取培養(yǎng)脂肪間充質(zhì)干細胞,并對提取培養(yǎng)的細胞進行鑒定。實驗分為轉(zhuǎn)染質(zhì)粒Pax6-EGFP組及對照組。轉(zhuǎn)化擴增Pax6-EGFP質(zhì)粒,用此質(zhì)粒通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染脂肪間充質(zhì)干細胞,然后通過G418抗性篩選出成功轉(zhuǎn)染的干細胞,篩選出的細胞繼續(xù)培養(yǎng)并對轉(zhuǎn)染效果進行鑒定。同時利用細胞克隆形成實驗對兩組細胞的活力及增殖速度進行比較。然后將細胞移植到角膜全層切除的新西蘭大白兔眼角膜上,并對其移植治療效果進行觀察。結(jié)果從SD大鼠腹股溝皮下脂肪處提取得來的細胞,該細胞呈長梭形形狀并向心性排列生長,且細胞CD90、CD105呈現(xiàn)陽性表達,而CD34、CD45表達呈陰性。Pax6-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染脂肪間充質(zhì)干細胞后,細胞表達綠色熒光蛋白能被激發(fā)出綠色熒光。G418抗性篩選所得Pax6-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染陽性的細胞,形狀呈鋪路石樣。細胞克隆形成實驗結(jié)果表明,未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細胞增殖活力較轉(zhuǎn)染質(zhì)粒細胞好,且增殖速度也更快。免疫熒光及western blot結(jié)果均表明,質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染后的細胞帶有綠色熒光,同時這些細胞還表達CK3-12、E-cadherin及Pax6-EGFP蛋白。將轉(zhuǎn)染Pax6-EGFP質(zhì)粒的干細胞移植到角膜全層切除及角膜緣深層破壞的新西蘭大白兔的角膜上,術(shù)后觀察到角膜表面光滑透亮無渾濁,且通過HE染色及倒置顯微鏡顯示新西蘭大白兔角膜表皮出現(xiàn)鋪路石樣細胞,并且該細胞帶有綠色熒光。結(jié)論經(jīng)過Pax6基因轉(zhuǎn)染可成功將脂肪間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)為角膜上皮樣細胞,并且此細胞可成功轉(zhuǎn)移至損傷的兔角膜上皮,有望作為一種移植細胞來源,治療損傷角膜。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R779.65
【目錄】：

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