本文選題：皮下培植　切入點(diǎn)：角膜緣干細(xì)胞　出處：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的探討以羊膜為載體,自體皮下培植兔角膜緣干細(xì)胞(Limbal stem cells, LSCs)的可行性。觀察培養(yǎng)的兔角膜緣干細(xì)胞聯(lián)合新鮮羊膜移植治療兔眼角膜緣干細(xì)胞缺乏性功能障礙(limbal stem cell deficiency,LSCD)的療效。 方法健康新西蘭大白兔55只,所有兔均取左眼角膜上方,角鞏膜緣灰白色交界處,2mm×3mm×lmm大小的角膜緣組織塊,用新鮮羊膜反折包裹后,埋植于自體左側(cè)皮下腹斜肌表面血管網(wǎng)處。分別于1周、2周、3周、4周取出組織塊進(jìn)行病理切片(HE染色)、免疫組織化學(xué)(P63、E-cadherin)檢查,判斷角膜緣干細(xì)胞是否存活、增生或分化。通過(guò)堿燒傷方法,將兔右眼制成LSCD模型。將成功建立LSCD模型的50只兔隨機(jī)分成5組：皮下培植角膜緣干細(xì)胞1周移植組(AM+LSC1W).皮下培植角膜緣干細(xì)胞2周移植組(AM+LSC2W).皮下培植角膜緣干細(xì)胞3周移植組(AM+LSC3W).皮下培植角膜緣干細(xì)胞4周移植組(AM+LSC4W)及單純新鮮羊膜移植組(AM)。每組10只兔10只眼。實(shí)驗(yàn)組(即AM+LSC1W組、AM+LSC2W組、AM+LSC3W組、AM+LSC4W組)用皮下培植的角膜緣干細(xì)胞聯(lián)合新鮮羊膜進(jìn)行移植手術(shù),對(duì)照組(AM組)用新鮮羊膜行手術(shù)。術(shù)后每周觀察角膜透明度、角膜新生血管生成程度、瞼球粘連情況,并記錄角膜上皮愈合時(shí)間。于術(shù)后1月對(duì)角膜形態(tài)(角膜新生血管、角膜混濁度)進(jìn)行評(píng)分,并摘除術(shù)眼,進(jìn)行病理學(xué)(HE染色和PAS染色)檢查。 結(jié)果培養(yǎng)前期(1W),組織塊細(xì)胞存活良好,多達(dá)10層以上的細(xì)胞,近似在體角膜緣細(xì)胞形態(tài),層次分明。細(xì)胞間緊密連接�；讓拥闹鶢罴�(xì)胞較多,P63強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),E-cadherin蛋白表達(dá)陰性。培養(yǎng)中期(2W、3W),培養(yǎng)的組織塊存活良好。2W的組織塊細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞層次明顯增多,基底層表達(dá)P63陽(yáng)性的細(xì)胞較第1W增多明顯,E-cadherin蛋白仍為陰性表達(dá)。3W時(shí)的組織塊細(xì)胞E-cadherin蛋白表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞增多。而培養(yǎng)后期(4W)的組織塊,細(xì)胞層數(shù)減少為4-5層,細(xì)胞形態(tài)為扁平細(xì)胞和翼狀細(xì)胞多見(jiàn),E-cadherin蛋白表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性。角膜緣干細(xì)胞缺乏性功能障礙模型建立后,各組間眼表新生血管及混濁度評(píng)分無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.111P0.05.F=0.265P0.05).移植術(shù)后1月,AM+LSC1W組角膜上皮愈合時(shí)間(19.70±1.34)d、AM+LSC2W組(18.90±2.38)d、AM+LSC3W組(18.90±2.92)d.AM+LSC4W組(20.10±2.02)d、AM組(25.50±1.27)d,各實(shí)驗(yàn)組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,與AM組相比,角膜上皮愈合時(shí)間短,比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。移植術(shù)后,AM+LSC1W組、AM+LSC2W組、AM+LSC3W組角膜眼表形態(tài)較術(shù)前明顯改善,角膜新生血管減少,混濁度減輕(P0.05).AM+LSC4W組及新鮮羊膜移植組術(shù)后眼表形態(tài)未得到明顯改善(P0.05).AM+LSC(2W)及AM+LSC(4W)組分別有1例出現(xiàn)瞼球粘連。 結(jié)論以羊膜為載體,短時(shí)間內(nèi)行皮下培植角膜緣干細(xì)胞的方法是可行的。培植時(shí)間3周時(shí),角膜緣干細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)分化。4周時(shí),培植的角膜緣干細(xì)胞組織片近似于角膜上皮組織結(jié)構(gòu)。皮下培植的角膜緣干細(xì)胞聯(lián)合新鮮羊膜移植治療兔眼LSCD,植片可以存活,術(shù)后可以促進(jìn)角膜上皮的愈合,并能有效的阻止角膜新生血管生成,減輕角膜混濁程度。
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【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R779.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1694985