本文選題：超聲　切入點(diǎn)：微泡造影劑　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：研究目的:本文通過體外實(shí)驗(yàn)研究超聲爆破微泡造影劑介導(dǎo)Rb94基因?qū)σ暰W(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的研究,以及探討Rb94基因?qū)σ暰W(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞的作用效果。 研究方法: 1.構(gòu)建增強(qiáng)型綠色熒光蛋白與Rb94基因的真核共表達(dá)載體并鑒定其在真核細(xì)胞中的表達(dá)。 2.微泡攜帶Rb94基因轉(zhuǎn)染HXO-Rb44細(xì)胞與傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法進(jìn)行了轉(zhuǎn)染效率的對比。 3.微泡攜帶Rb94基因轉(zhuǎn)染HXO-Rb44細(xì)胞對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞生長活性的影響。 研究結(jié)果: 1.重組克隆載體內(nèi)的目的片段序列與Rb94基因序列完全一致。pEGFP-C1/Rb94酶切鑒定結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致。熒光顯微鏡下觀察可見轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞有熒光出現(xiàn)。Western blot檢測結(jié)果表明Rb94基因得到了有效表達(dá)。 2.以0.5W/cm2聲強(qiáng),輻照時(shí)間30s的連續(xù)波,對HXO-Rb44細(xì)胞進(jìn)行Rb94基因的轉(zhuǎn)染,并同傳統(tǒng)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法進(jìn)行了轉(zhuǎn)染效率的比較�？召|(zhì)粒+微泡+超聲組、Rb94質(zhì)粒+微泡+超聲組及Rb94質(zhì)粒+脂質(zhì)體組的綠色熒光表達(dá)明顯高于空白對照組、Rb94質(zhì)粒+微泡及Rb94質(zhì)粒+超聲組�？召|(zhì)粒+微泡+超聲組、Rb94質(zhì)粒+微泡+超聲組及Rb94質(zhì)粒+脂質(zhì)體組的轉(zhuǎn)染效率明顯高于其他各組,且這三組之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR檢測結(jié)果顯示:Rb94質(zhì)粒+超聲+微泡與Rb94質(zhì)粒+脂質(zhì)體組的RB94mRNA表達(dá)明顯強(qiáng)于其他各組。Western blot檢測結(jié)果顯示,Rb94質(zhì)粒+超聲+微泡與Rb94質(zhì)粒+脂質(zhì)體組的RB94蛋白含量明顯高于其他各組。 3.各組細(xì)胞的處理方法同前,檢測Rb94基因轉(zhuǎn)染后對HXO-Rb44細(xì)胞生長活性的影響。Rb94質(zhì)粒+超聲+微泡組與Rb94質(zhì)粒+脂質(zhì)體組的MTT值明顯小于其余各組。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期結(jié)果顯示,Rb94質(zhì)粒+超聲+微泡與Rb94質(zhì)粒+脂質(zhì)體組G2期細(xì)胞隨著時(shí)間的延長逐漸增多。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示Rb94質(zhì)粒+超聲+微泡組的細(xì)胞凋亡率為28.7%,Rb94質(zhì)粒+脂質(zhì)體組的細(xì)胞凋亡率為28.6%,明顯高于其他各組,兩組間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)以超聲微泡造影劑為基因載體對體外培養(yǎng)的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞進(jìn)行抑癌基因的轉(zhuǎn)染,探討了其對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞生長活性的影響,與傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法作了轉(zhuǎn)染效率的比較,并檢測了Rb94基因?qū)σ暰W(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞生長活性的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示超聲微泡作為一種新型的基因轉(zhuǎn)染介質(zhì),可達(dá)到高效的基因轉(zhuǎn)染目的。Rb94基因?qū)σ暰W(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞的生長具有明顯的抑制作用。然而視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的基因治療尚處于起步階段,本實(shí)驗(yàn)僅為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)積累了一定資料,真正應(yīng)用于臨床還需進(jìn)一步的研究。
[Abstract]:Objective: to investigate the transfection efficiency of Rb94 gene into retinoblastoma cells and the effect of Rb94 gene on retinoblastoma cells in vitro. Research methods:. 1. The eukaryotic coexpression vector of enhanced green fluorescent protein (GFP) and Rb94 gene was constructed and its expression in eukaryotic cells was identified. 2. The transfection efficiency of microbubbles carrying Rb94 gene into HXO-Rb44 cells was compared with that of traditional liposome transfection methods. 3. The effect of Rb94 gene transfection into HXO-Rb44 cells on the growth activity of retinoblastoma cells. Results of the study:. 1. The sequence of the target fragment in the recombinant clone vector was completely consistent with the sequence of Rb94 gene. The result of restriction enzyme digestion of pEGFP-C1 / Rb94 was in agreement with the expected result. The fluorescence appearance of the transfected cells was observed under fluorescence microscope. Western blot analysis showed that Rb94 was detected. The gene was effectively expressed. 2. HXO-Rb44 cells were transfected with Rb94 gene by continuous wave of 0.5W/cm2 intensity and irradiation time for 30s. The transfection efficiency was compared with the traditional liposome transfection method. The green fluorescence expression of Rb94 plasmid microbubble ultrasound group and Rb94 plasmid liposome group was significantly higher than that of the blank control group. The transfection efficiency of abscission plasmid microbubble ultrasound group and Rb94 plasmid liposome group was significantly higher than that of other groups, and the transfection efficiency of Rb94 plasmid microbubble ultrasound group and Rb94 plasmid liposome group was significantly higher than that of other groups. There was no significant difference among the three groups. RT-PCR results showed that the expression of RB94mRNA in the microbubbles and liposomes of Rb94 plasmids was significantly stronger than that in the other groups. Western blot analysis showed that the expression of Rb94 plasmids was significantly higher than that of the other groups. The content of RB94 protein in liposomes of vesicles and Rb94 plasmids was significantly higher than that in other groups. 3. The treatment of cells in each group was the same as before. The effect of Rb94 gene transfection on the growth activity of HXO-Rb44 cells. The MTT value of Rb94 plasmid ultrasound microbubble group and Rb94 plasmid liposome group was significantly lower than that of other groups. Flow cytometry analysis of cell cycle showed that Rb94 plasmid was super. The cell apoptosis rate of Rb94 plasmid ultrasound microbubble group was 28.775% and that of Rb94 plasmid liposome group was 28.775% by flow cytometry. The apoptotic rate of the tumor cells was 28. 6%, which was significantly higher than that of the other groups. The difference between the two groups was not statistically significant. Conclusion. In this study, tumor suppressor gene transfection of retinoblastoma cells was carried out using ultrasound microbubble contrast medium as gene carrier, and the effect of tumor suppressor gene on the growth activity of retinoblastoma cells was investigated. The transfection efficiency was compared with the traditional transfection method, and the effect of Rb94 gene on the growth activity of retinoblastoma cells was detected. Rb94 gene can inhibit the growth of retinoblastoma cells, but the gene therapy of retinoblastoma is still in its infancy. Further research is needed for its application in clinical practice.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R739.7

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本文編號：1671452