本文選題：Butein　切入點：葡萄膜黑色素瘤細胞　出處：《吉林大學》2013年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：葡萄膜黑色素瘤是成人原發(fā)內眼腫瘤中最常見的一種腫瘤。在美國每百萬人每年葡萄膜黑色素瘤的發(fā)病率在6-7例，盡管在過去的幾十年內葡萄膜黑色素瘤診斷及治療有新進展，但其預后仍然很差，大約有31%的人在診斷后5年內由于葡萄膜黑色素瘤而死亡，25年后將有半數的病人死亡，這類患者中常見轉移，肝臟是轉移最好發(fā)的部位。葡萄膜黑色素瘤患者10年累計轉移率達34%，針對腫瘤的轉移有許多的治療措施，但是收效甚微，葡萄膜黑色素瘤肝轉移患者大部分在6個月內死亡，確診轉移后平均生存時間只有3.6個月。由于葡萄膜黑色素瘤患者預后極差，急需新的治療措施。 Butein是一種從腰果樹、降香黃檀和漆樹中提取的多元酚，在中國及韓國曾用來治療各種疾病，包括胃癌。曾有研究Butein有不同的藥理作用，包括抗氧化、抗炎癥及抗新生血管活性，最近體內及體外研究表明Butein有抗癌活性，它能抑制不同種類的惡性腫瘤細胞的增殖并誘導這些細胞凋亡。作為有效地防癌及治癌藥物，Butein受到很多關注，而對正常細胞，它的毒性很少。在動物實驗模型中，Butein能抑制肝癌細胞的生長，另一項胃癌的臨床實驗發(fā)現這種藥物耐受性好，并可能使腫瘤縮小。Butein對黑色素瘤的作用研究只有針對鼠皮膚黑色素瘤的實驗，研究發(fā)現Butein可以抑制鼠B16皮膚黑色素瘤細胞的增殖并促進腫瘤細胞的凋亡，而對人葡萄膜黑色素瘤細胞的作用還沒有報道，葡萄膜黑色素瘤與皮膚黑色素瘤不僅流行病學及病因學不同，分子生物學模式也不同，所以這兩種黑色素瘤細胞被認為是不同的種類，應該對每種黑色素瘤細胞進行獨立的研究，本研究的目的是探索Butein的細胞毒作用，研究在體外對人類葡萄膜黑色素細胞瘤可能的防止及治療作用，并研究其對正常的人類鞏膜成纖維細胞及視網膜色素上皮細胞的作用。Butein誘導葡萄膜黑色素瘤細胞生物學改變，線粒體膜電位的變化后釋放細胞色素C，活化細胞凋亡蛋白酶9及3，通過這些研究闡明了Butein誘導黑色素細胞的信號通路。 1方法 三種人葡萄膜黑色素瘤細胞系(M17、SP6.5和C918)，視網膜色素上皮細胞及鞏膜成纖維細胞與不同濃度的Butein培養(yǎng)，通過MTT評價Butein對細胞活力的影響，通過流式細胞儀分析細胞的凋亡，用JC-1酶標儀評價線粒體膜電位改變，酶聯免疫吸附試驗分析細胞凋亡蛋白3、8、9的改變。 2結果 Butein減少培養(yǎng)的人葡萄膜黑色素瘤的活性，呈劑量依賴效應(10、30、100μM)，SP6.5的半數抑制濃度IC50在13.3μM，M17在15.8μM，在轉移的惡性C918細胞系有類似的劑量，為16.7μM，Butein在較低的濃度時選擇性的抑制葡萄膜黑色素細胞的活性，而對視網膜色素上皮細胞及成纖維細胞作用較小，Butein通過增加線粒體膜通透性及增加細胞色素C及凋亡蛋白9、3（不通過凋亡蛋白8）活性誘導腫瘤細胞凋亡。 3結論 30μM Butein誘導培養(yǎng)的人葡萄膜黑色素細胞凋亡，所以即使都是通過同一通路引起凋亡，人葡萄膜黑色素瘤與鼠皮膚黑色素瘤細胞相比前者對Butein更加敏感。本研究表明100-300μM Butein可以殺傷3種人葡萄膜黑色素細胞瘤細胞(M17、SP6.5和C918)。C918細胞是轉移性細胞系，也可被Butein抑制，表明即使是高度侵入性的葡萄膜黑色素瘤細胞系也對Butein敏感。10μM及30μMButein對正常的視網膜色素上皮細胞及鞏膜成纖維細胞無影響，表明Butein對葡萄膜黑色素細胞的特殊抗腫瘤特性。用低濃度Butein培養(yǎng)細胞后，部分細胞被膜連蛋白染色，而不被EtD-III染色，提示存在早期的凋亡。用高濃度的Butein處理細胞后，大部分被膜連蛋白染色，一部分被EtD-III染色，提示凋亡已經處于晚期，細胞膜已經損壞。Butein損害了線粒體膜電位，增加了細胞色素C及凋亡蛋白酶9,3的表達，并呈劑量依賴性。而凋亡蛋白酶8沒有明顯改變。這表明Butein是通過線粒體途徑引起葡萄膜黑色素細胞瘤凋亡�？傊�，低濃度的Butein可以誘導人葡萄膜黑色素瘤細胞凋亡而對正常細胞影響較小，表明在體外Butein對人葡萄膜黑色素瘤是一個選擇性的有效的細胞凋亡藥物。因為轉移的黑色素瘤細胞對于傳統(tǒng)的化療藥物有很強的抗藥性，，而Butein對轉移的C918細胞具有殺傷作用，所以Butein可能有望成為具有轉移的黑色素瘤細胞的治療及防治藥物，由于Butein的生物利用度及血漿濃度的研究剛剛起步，有必要進一步改變劑型及研究其與其他抗腫瘤藥物的相互作用。
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【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.7

【參考文獻】

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1 Steven A. McCormick;;Progress in the studies of etiology,epidemiology and pathogenesis of ocular melanomas[J];Eye Science;2011年01期

本文編號：1649895