發(fā)布時間：2018-03-19 01:03

  本文選題：蛋白質(zhì)組學(xué)　切入點：晶狀體　出處：《吉林大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：糖尿病性白內(nèi)障是一種常見的糖尿病并發(fā)癥,在糖尿病引起的眼病中位居第二位,其發(fā)病機(jī)制有諸如：滲透壓學(xué)說、蛋白質(zhì)糖基化學(xué)說、氧化應(yīng)力學(xué)說等。由于晶狀體是生物體內(nèi)蛋白質(zhì)含量最高的組織,很適于應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法來對其進(jìn)行研究。近年來,隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的建立和發(fā)展,該技術(shù)已越來越多的應(yīng)用到晶狀體疾病的研究中。 蛋白質(zhì)組學(xué)是從蛋白質(zhì)組的水平上認(rèn)識生命活動的機(jī)理和疾病發(fā)生的機(jī)制,它是對研究對象蛋白質(zhì)水平整體的研究,其中雙向電泳技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)的核心技術(shù),它是截至目前為止常用的能連續(xù)在一塊膠上分離數(shù)千種蛋白質(zhì)的唯一方法。 目的 本實驗應(yīng)用差異凝膠電泳的方法(2-D DIGE)結(jié)合圖像分析軟件找出混濁程度不同的糖尿病性白內(nèi)障大鼠晶狀體與正常大鼠晶狀體蛋白質(zhì)總體變化趨勢,旨在發(fā)現(xiàn)有差異表達(dá)的蛋白質(zhì),為質(zhì)譜分析和確定在疾病發(fā)生過程中起主要作用的蛋白質(zhì)打下基礎(chǔ)。 方法 運用小劑量鏈脲佐菌素(STZ)+特殊膳食喂養(yǎng)法飼養(yǎng)同一周齡的SD大鼠20只,每組10只,另取10只同周齡SD大鼠作對照組。后分別取造模后6周、20周及對照組大鼠晶狀體各10只作為樣本。所有樣品經(jīng)過研磨碎裂,使用Clean-up試劑盒除鹽,及運用蛋白質(zhì)試劑盒蛋白定量；再從每樣品中取出50μg,用熒光染料Cy3、Cy5標(biāo)記所選的蛋白質(zhì)樣品,內(nèi)標(biāo)用Cy2染料標(biāo)記；然后混勻每塊膠中的樣品,將樣品加入固相pH梯度干膠條內(nèi),進(jìn)行等電聚焦(IFE)；等電聚焦結(jié)束后,需平衡膠條2次,然后轉(zhuǎn)移至SDS-PAGE凝膠中進(jìn)行二向電泳(SDS—PAGE);結(jié)束后,采用激光掃描儀進(jìn)行熒光掃描,并使用DeCyder差異分析軟件分析,找出差異表達(dá)蛋白質(zhì)點。 結(jié)果 最終三組樣品共檢測到65個有差異蛋白質(zhì)點,隨晶狀體混濁程度的加重,可見39個點上調(diào)表達(dá),26個點下調(diào)表達(dá)(蛋白表達(dá)量上調(diào)或下調(diào)超過50%即1.5倍、p0.05的蛋白點定義為差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點),其中差異量達(dá)到3倍的點共19個(P0.05)。 結(jié)論 糖尿病性白內(nèi)障大鼠和正常大鼠晶狀體存在蛋白表達(dá)的差異,糖尿病性白內(nèi)障大鼠混濁程度不同的晶狀體和正常大鼠晶狀體同一匹配的蛋白存在表達(dá)量的上升或下降。這種蛋白質(zhì)的差異變化可能與糖尿病性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。
[Abstract]:Diabetic cataract is a common diabetic complication. It is the second most common diabetic eye disease. Its pathogenesis includes osmotic pressure theory, protein glycosylated chemistry, The theory of oxidative stress. Because lens is the tissue with the highest protein content in organism, it is very suitable to use proteomics method to study it. In recent years, with the establishment and development of proteomics technology, This technique has been applied more and more to the study of lens diseases. Proteomics is the understanding of the mechanism of life activity and the mechanism of disease from the proteome level. It is the whole study of the protein level of the object of study, in which two-dimensional electrophoresis is the core technology of proteomics. It is the only method used so far to separate thousands of proteins on a piece of glue. Purpose. In this experiment, we used differential gel electrophoresis (DIGE) and image analysis software to find out the general change trend of lens protein in diabetic cataract rats with different turbidity degree and normal rats. The aim of this study is to find differentially expressed proteins and to lay a foundation for mass spectrometry analysis and identification of proteins that play a major role in the pathogenesis of disease. Method. Twenty Sprague-Dawley rats of the same week age were fed with a special diet with low dose streptozotocin (STZ) for 10 rats in each group. Another 10 SD rats of the same age were taken as control group. After 6 weeks and 20 weeks of model making and 10 rats of control group, the lens of each group were taken as samples. All the samples were ground to pieces, Clean-up kit was used to desalinate and protein kit was used to quantify protein. Then 50 渭 g of each sample was taken out, the selected protein sample was labeled with fluorescent dye Cy3OC5, and the internal standard was labeled with Cy2 dye. Then, the samples in each gel were mixed together, and the samples were added into the solid phase pH gradient dry tape for isoelectric focusing. We need to balance the tape twice, then transfer it to SDS-PAGE gel for two dimensional electrophoresis. After that, we use laser scanner for fluorescence scanning and DeCyder differential analysis software to find the differentially expressed protein spots. Results. In the end, 65 differentially expressed protein spots were detected in the three groups, with the increase of lens opacity. The results showed that 39 sites up-regulated and 26 down-regulated (protein expression more than 50%, i.e. 1.5-fold p0.05) were defined as differentially expressed protein spots. Conclusion. There was a difference in protein expression between diabetic cataract rats and normal rats. The expression of the same matching protein in the lens of diabetic cataract rats with different degree of opacity was increased or decreased, which may be related to the pathogenesis of diabetic cataract.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R776.1

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本文編號：1632107