本文關(guān)鍵詞： 角膜緣干細(xì)胞 增齡 角膜基質(zhì) △Np63 ABCG2　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的：通過將不同年齡兔角膜緣干細(xì)胞種植于不同年齡兔角膜基質(zhì)載體上,觀察同種異體角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的兔角膜緣干細(xì)胞生物學(xué)特性隨增齡的變化,探討了增齡對在角膜基質(zhì)載體上培養(yǎng)的LSCs增殖能力的影響,同時檢測了角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞的相關(guān)性標(biāo)記物ΔNp63、ABCG2的表達(dá)量隨增齡的變化,探討其與載體培養(yǎng)的干細(xì)胞老化有無關(guān)系,為組織工程化角膜種子細(xì)胞選擇的成因開辟了新途徑。 方法：對照實驗研究。用酶消化法將不同年齡新西蘭兔角膜緣組織制成細(xì)胞懸液培養(yǎng),以相同的細(xì)胞密度種植于不同年齡的新西蘭兔的角膜基質(zhì)上,觀察角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞的生長情況,原位雜交檢測ABCG2、ΔNp63的表達(dá),鑒定LSCs, IPP5.1軟件分析圖像,流式細(xì)胞術(shù)測細(xì)胞周期,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的細(xì)胞中ΔNp63、ABCG2蛋白的表達(dá)量,運用SPSS13.0軟件對析因設(shè)計資料進(jìn)行方差分析。 結(jié)果：種植于不同年齡角膜基質(zhì)載體上的青年角膜緣干細(xì)胞較其他組增殖快,潛伏期短,形態(tài)較小,以圓形、橢圓形和多邊形為主,形成的集落較大。傳代培養(yǎng)于角膜基質(zhì)載體上的LSCs經(jīng)ABCG2、p63原位雜交檢測,DAB染色大部分細(xì)胞呈陽性反應(yīng),細(xì)胞胞漿著色呈棕黃色,胞核為藍(lán)色。角膜緣干細(xì)胞供體年齡各水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義,相同時間內(nèi)角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的青年兔角膜緣干細(xì)胞增殖期細(xì)胞所占比例大,ΔNp63、ABCG2表達(dá)量高；而角膜基質(zhì)供體年齡各水平差異與角膜緣干細(xì)胞和角膜基質(zhì)的交互作用均無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞的增殖能力隨著角膜緣干細(xì)胞供體年齡的增加而降低。ΔNp63、ABCG2蛋白的表達(dá)具有明顯的年齡相關(guān)性,隨著增齡ΔNp63、ABCG2蛋白表達(dá)量下調(diào)可能是載體培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞老化的分子機制之一
[Abstract]:Objective: to observe the biological characteristics of corneal limbal stem cells cultured with different age of rabbit corneal stromal cells, and to observe the changes of biological characteristics of corneal limbal stem cells cultured with allogeneic corneal stromal cells on the corneal stromal cells of rabbits of different ages. The effect of aging on the proliferation of LSCs cultured on corneal stromal carrier was studied. The expression of 螖 Np63 ABCG2, a relative marker of limbal stem cells cultured on corneal stroma carrier, was detected with age. To explore whether it is related to the aging of stem cells in carrier culture, and to open a new way for the selection of corneal seed cells in tissue engineering. Methods: the control experiment was carried out. The corneal limbus tissue of New Zealand rabbits of different ages was cultured with cell suspension by enzyme digestion and implanted on the corneal stroma of New Zealand rabbits of different ages with the same cell density. The growth of corneal limbal stem cells cultured with corneal stromal media was observed. The expressions of ABCG2 and 螖 Np63 were detected by in situ hybridization, and the images were identified by IPP5.1 software. The cell cycle was measured by flow cytometry. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the expression of 螖 Np63 ABCG2 protein in the cells cultured with corneal stromal vector. The variance analysis of factorial design data was performed with SPSS13.0 software. Results: the proliferation of corneal limbal stem cells planted on corneal stromal carrier of different ages was faster, the incubation period was shorter, the shape was smaller, and the cells were mainly round, elliptical and polygonal. The LSCs cultured on the corneal stromal carrier was detected by in situ hybridization with ABCG2P63 to detect the positive reaction of most of the cells, and the cytoplasm of the cells was brownish yellow. The nucleus was blue. The age of corneal limbal stem cells was significantly different. In the same time, the percentage of proliferative cells of corneal limbal stem cells was large and the expression of 螖 Np63 ABCG2 was high in young rabbit corneal limbal stem cells cultured with corneal stromal cells at the same time. However, there was no significant difference between corneal stromal donor age and corneal limbal stem cells and corneal stroma. Conclusion: the proliferation ability of corneal limbal stem cells cultured with corneal stromal cells decreased with the age of corneal limbal stem cells, and the expression of 螖 Np63 ABCG2 protein was significantly age-related. The down-regulation of 螖 Np63 ABCG2 protein expression with aging may be one of the molecular mechanisms of corneal limbal stem cell aging in vector culture.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R779.65

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本文編號：1549863