本文關(guān)鍵詞： 變應(yīng)性鼻炎 IL-9 Th9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR　出處：《江蘇大學(xué)》2010年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的: 建立檢測(cè)IL-9 mRNA的SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢測(cè)方法,并通過(guò)檢測(cè)變應(yīng)性鼻炎患者Th9的主要細(xì)胞因子IL-9的表達(dá)水平,初步分析IL-9在變應(yīng)性鼻炎患者的變化情況,探討其在該疾病中的意義。 方法: 1)分離健康志愿者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),采用PCR擴(kuò)增目的基因序列,T-A克隆,構(gòu)建目的基因定量PCR檢測(cè)用質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。 2)建立檢測(cè)該基因的SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,并評(píng)價(jià)該方法的線性范圍、特異性及精密度水平。 3)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)變應(yīng)性鼻炎患者血漿IL-9濃度。 4)收集30例變應(yīng)性鼻炎患者,19例臨床緩解患者,30例健康志愿者外周血標(biāo)本,均來(lái)自江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院。運(yùn)用上述兩種方法檢測(cè)外周血中IL-9的相對(duì)表達(dá)水平。 結(jié)果: 1)重組質(zhì)粒經(jīng)測(cè)序鑒定為含IL-9目的片段,共110個(gè)堿基對(duì),未發(fā)生突變,由此構(gòu)建IL-9定量用檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒。 2)采用SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,成功構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r~2達(dá)到0.999以上,最低檢出限為10~1copies/μl。 3)變應(yīng)性鼻炎未治療組(n=30)外周血中IL-9 mRNA相對(duì)表達(dá)水平明顯高于變應(yīng)性鼻炎臨床緩解組(n=19)和正常對(duì)照組(n=30)(P＜0.01),而變應(yīng)性鼻炎臨床緩解組外周血中IL-9 mRNA相對(duì)表達(dá)水平與正常對(duì)照組相比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。ELISA檢測(cè)水平也呈現(xiàn)相同的結(jié)果。 結(jié)論: 1)本研究建立了檢測(cè)IL-9的SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。 2)變應(yīng)性鼻炎患者外周血中存在Th9細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-9的高表達(dá)。IL-9可能參與了變應(yīng)性鼻炎的病理過(guò)程,Th9參與變應(yīng)性鼻炎病理過(guò)程具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:Objective:. To establish a method for detecting SYBR Green 鈪，

本文編號(hào)：1549698