發(fā)布時間：2018-02-25 09:33

  本文關(guān)鍵詞： HSP70-2 鼻咽癌 慢病毒 ZSGS-4　出處：《暨南大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的： 本研究通過慢病毒技術(shù)上調(diào)鼻咽癌細胞6-10B的HSP70-2基因的表達和異黃酮類藥物ZSGS-4下調(diào)鼻咽癌細胞6-10B和5-8F的HSP70-2基因的表達，探索HSP70-2基因?qū)Ρ茄拾┘毎鲋车挠绊憽?方法： 一方面應用慢病毒技術(shù)，構(gòu)建pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo目的慢病毒載體和pLV-CMV-eGFP-Neo空載慢病毒載體，分別獲得目的慢病毒和空載慢病毒轉(zhuǎn)導的6-10B細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株，即6-10B-HSP70-2/eGFP細胞（目的基因組）和6-10B-blank/eGFP細胞（空載對照組），上調(diào)6-10B細胞HSP70-2基因表達。另一方面應用黃酮類藥物ZSGS-4下調(diào)鼻咽癌細胞6-10B和5-8F的HSP70-2基因表達。繼而應用Western blotting檢測hsp70-2蛋白表達水平；CCK8檢測細胞生長曲線；流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡狀況。 結(jié)果： 首先構(gòu)建了pEntry221-HSP70-2-IRES/eGFP入門載體，再應用LR反應構(gòu)建了pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo目的慢病毒載體和pLV-CMV-eGFP-Neo空載慢病毒載體，再運用慢病毒4質(zhì)粒包裝系統(tǒng)成功包裝出目的慢病毒和空載慢病毒，分別轉(zhuǎn)導6-10B細胞后經(jīng)G418篩選出各自的單克隆細胞，利用Western blotting方法檢測各組細胞hsp70-2蛋白表達水平，，即6-10B-HSP70-2/eGFP細胞組與6-10B-blank/eGFP細胞組或與6-10B細胞組比較，hsp70-2蛋白表達量升高75.31±3.54%（P0.01）或75.13±3.36%（P0.01），驗證了6-10B-HSP70-2/eGFP和6-10B-blank/eGFP細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株。6-10B-HSP70-2/eGFP細胞、6-10B-blank/eGFP細胞和6-10B細胞分別培養(yǎng)24h、48h和72h后，6-10B-HSP70-2/eGFP細胞與6-10B-blank/eGFP細胞比較，細胞增殖率分別升高29.18±0.014%（P0.01）、81.72±0.124%（P0.001）和41.84±0.004%（P0.001）；與6-10B細胞比較，細胞增殖率分別升高25.69±0.031%（P0.01）、84.53±0.060%（P0.001）和45.28±0.044%（P0.001）。6-10B-HSP70-2/eGFP細胞、6-10B-blank/eGFP細胞和6-10B細胞分別培養(yǎng)24h后，6-10B-HSP70-2/eGFP細胞與6-10B-blank/eGFP細胞比較，增殖指數(shù)（PI）和S期細胞比率（SPF）分別增加73.31±5.882%（P0.001）和71.09±7.495%（P0.01）；與6-10B細胞比較，PI和SPF分別增加72.60±1.300%（P0.001）和69.29±13.42%（P0.01）。細胞凋亡百分比，各組間相比無明顯變化（P0.05）。 另一方面，應用不同濃度的異黃酮類藥物ZSGS-4（0μg/mL、10μg/mL、12.5μg/mL、15μg/mL和17.5μg/mL）分別處理6-10B和5-8F細胞12h。各實驗組與對照組比較，hsp70-2蛋白的表達水平明顯降低（p0.05）；細胞抑制率明顯增強（p0.05）；G0/G1期和S期DNA含量明顯降低（p0.05）；subG0/G1期和G2/M期DNA含量明顯升高（p0.05）；細胞凋亡率明顯升高（p0.05）。 結(jié)論： 本研究通過上調(diào)鼻咽癌細胞6-10B的hsp70-2蛋白表達，促進其生長增殖；而下調(diào)鼻咽癌細胞6-10B和5-8F的hsp70-2蛋白表達，抑制其生長增殖和促使其凋亡。
[Abstract]:Objective:
In this study, lentivirus technology was used to upregulate the expression of HSP70-2 gene in nasopharyngeal carcinoma cell 6-10B and the expression of HSP70-2 gene in 6-10B and 5-8F of nasopharyngeal carcinoma cell line ZSGS-4, and to explore the effect of HSP70-2 gene on the proliferation of nasopharyngeal carcinoma cells.
Method錛

本文編號：1533887