本文關(guān)鍵詞： Graves眼病 Th17細(xì)胞 IL-6 IL-17 IL-23 Graves眼病 IL-17mRNA ROR γtmRNA Graves眼病 甲強(qiáng)龍 Th17 IL-17　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2013年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景 Graves眼病(Graves' ophthalmopathy, GO)是一種器官特異的自身免疫性疾病,其組織學(xué)特征是眶周組織淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)�？糁艿腡細(xì)胞、巨噬細(xì)胞合成并釋放大量的細(xì)胞因子到組織中,該免疫過(guò)程可直接導(dǎo)致纖維細(xì)胞增生,葡糖胺聚糖合成等一系列生物反應(yīng)。Graves眼病可出現(xiàn)一系列臨床表現(xiàn),如眼痛、眼球突出、眶周水腫、眼外肌運(yùn)動(dòng)障礙、炎癥及損害視力等。大約有20-25%的甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)的病人發(fā)生Graves眼病。Graves眼病發(fā)病的機(jī)制至今仍不是十分清楚,臨床治療也有一定困難。 現(xiàn)在的觀點(diǎn)認(rèn)為：Graves眼病的發(fā)病是一種多基因遺傳、多因素作用參與的T細(xì)胞免疫介導(dǎo)性疾病,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。其中CD4+淋巴細(xì)胞免疫功能異常在其發(fā)病中尤為重要。CD4+輔助性T細(xì)胞(helper T cells, Th)是一類重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,它對(duì)維持機(jī)體的免疫平衡發(fā)揮重要作用。傳統(tǒng)觀念將CD4+Th細(xì)胞分為Thl和Th2兩類細(xì)胞亞群。Thl分泌IFN-γ和IL-12等細(xì)胞因子,在清除胞內(nèi)菌時(shí)起重要作用；而Th2分泌IL-4、IL-2等細(xì)胞因子,主要影響寄生蟲(chóng)和胞外菌的清除,IFN-γ和IL-4分別是Thl和Th2細(xì)胞亞群標(biāo)志性細(xì)胞因子。最近,CD4+Th細(xì)胞家族新型成員----Th17細(xì)胞亞群的發(fā)現(xiàn),改寫了經(jīng)典的Thl/Th2細(xì)胞免疫模式,在維持機(jī)體免疫平衡方面發(fā)揮重要作用,是對(duì)Thl/Th2免疫平衡理論的重要補(bǔ)充。這類細(xì)胞主要以分泌IL-17(IL-17A)、IL-17F、IL-21、IL-22等細(xì)胞因子為特征,其增殖、分化過(guò)程需要IL-6和TGF-β的參與,并且需要STAT3依賴性的轉(zhuǎn)錄因子ROR γ t、ROR α的表達(dá)。Th17細(xì)胞免疫反應(yīng)在腫瘤免疫以及多種自身免疫性疾病的免疫發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用。IL-23主要作用于Th17細(xì)胞,維持其表達(dá),研究證實(shí)IL-23刺激Th17細(xì)胞的擴(kuò)增和維持。IL-23在Th17細(xì)胞的誘導(dǎo)分化中起了很重要的強(qiáng)化和穩(wěn)固作用,Th17細(xì)胞通過(guò)分泌包括IL-17在內(nèi)的多種細(xì)胞因子參與炎癥反應(yīng),部分學(xué)者提出自身免疫性炎癥的IL-23/IL-17軸的重要作用理論。 Graves眼病的病程經(jīng)歷兩個(gè)階段：早期為活動(dòng)期,主要病理表現(xiàn)為眼部淋巴細(xì)胞和炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)、氨基葡聚糖的沉積與水腫；晚期為穩(wěn)定期,表現(xiàn)為球后組織的纖維化及脂肪的沉積。病程不同時(shí)期Graves眼病患者采取的治療方法和療效不同,因此正確評(píng)判Graves眼病的病情對(duì)治療方法的選擇和預(yù)后的估計(jì)有重要意義。目前Graves眼病眼病的免疫治療,最基本最常用的是糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用。大量證據(jù)表明,糖皮質(zhì)激素對(duì)中重度浸潤(rùn)性突眼的治療尤其有效,中重度及活動(dòng)性Graves眼病患者靜脈使用糖皮質(zhì)激素類藥物的有效率可達(dá)77%。Graves眼病治療時(shí)口服制劑多使用強(qiáng)的松,靜脈制劑多使用甲基強(qiáng)的松龍。甲基強(qiáng)的松龍是腎上腺糖皮質(zhì)激素,具有多方面生理功能,對(duì)免疫反應(yīng)的許多環(huán)節(jié)都有抑制作用。 本研究擬觀察Graves眼病患者Th17細(xì)胞在外周血PBMC的比例及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá),并評(píng)價(jià)其與Graves眼病臨床相關(guān)性及意義,并觀察糖皮質(zhì)激素(甲強(qiáng)龍)作用于Graves眼病患者PBMC時(shí)對(duì)Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的影響作用,進(jìn)一步探討糖皮質(zhì)激素(甲強(qiáng)龍)治療Graves眼病新的作用機(jī)制。 第一章Graves眼病患者外周血Thl7細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的變化及臨床意義 目的 通過(guò)檢測(cè)Graves眼病患者外周血中的的Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子IL-6、IL-17、IL-23的表達(dá)水平,探討Graves眼病與正常人之間以及Graves眼病不同期患者之間Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的差異及其臨床相關(guān)性,初步明確Th17細(xì)胞在Graves眼病發(fā)病中的作用機(jī)制及臨床意義。 方法 (1)選取未經(jīng)治療的Graves眼病患者(GO組)40例,根據(jù)臨床活動(dòng)性評(píng)分(CAS)將Graves眼病患者分為活動(dòng)性GO組20例(CAS≥3),非活動(dòng)性GO組20例(CAS3)；同時(shí)選取未經(jīng)治療的同期非突眼Graves病患者(GD組)20例及健康體檢的正常對(duì)照組20例。 (2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中Th17細(xì)胞表達(dá)水平,雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中IL-6、IL-17、IL-23的表達(dá)水平,并分別與CAS評(píng)分、TSH、FT3、FT4、TRAb、突眼度等臨床或?qū)嶒?yàn)室指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。 (3)統(tǒng)計(jì)分析方法：采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,單變量?jī)山M資料之間的比較采用t檢驗(yàn),多組資料之間的比較采用單因素方差分析,方差齊時(shí),多重比較采用LSD法,方差不齊時(shí)進(jìn)行Welch法校正,采用Dunnett's T3法進(jìn)行組間多重比較。正態(tài)分布資料的相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析,不符合正態(tài)分布的資料用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 (1)流式細(xì)胞染色示：GO組患者Th17細(xì)胞比例較正常對(duì)照組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.24±0.18%vs0.55±0.09%P0.05；0.99±0.13%vs0.55±0.09%P0.05)�；顒�(dòng)性GO組患者Th17細(xì)胞比例高于非活動(dòng)性GO組(1.24±0.18%vs0.99±0.13%；P0.05)和GD組(1.24±0.18%vs0.97±0.16%；P0.05)；而非活動(dòng)性GO組患者Th17細(xì)胞比例與GD組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。相關(guān)性檢驗(yàn)分析顯示GO組患者Th17細(xì)胞表達(dá)水平與臨床活動(dòng)性評(píng)分(CAS)呈正相關(guān)(P0.05),而與TSH、FT3、FT4、TRAb、突眼度之間均無(wú)顯著性關(guān)聯(lián)(P0.05)。 (2) ELISA檢測(cè)結(jié)果示：GO組患者血清中IL-6、IL-17、IL-23的表達(dá)水平高于正常對(duì)照組(P0.05)�；顒�(dòng)性GO組患者IL-17、IL-23的表達(dá)水平高于非活動(dòng)性GO組和GD組(P0.05)；而非活動(dòng)性GO組患者IL-17、IL-23表達(dá)水平與GD組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。IL-6在GO組、GD組和正常對(duì)照組三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。相關(guān)性檢驗(yàn)分析顯示GO組患者IL-17、IL-23的表達(dá)水平與臨床活動(dòng)性評(píng)分(CAS)呈正相關(guān)(P0.05),而與突眼度、實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)(TSH、FT3、FT4、TRAb)之間均無(wú)顯著性關(guān)聯(lián)(P0.05)。 結(jié)論 GO組患者Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子IL-6、IL-17、IL-23的表達(dá)水平高于正常對(duì)照組,且活動(dòng)期患者高于非活動(dòng)期患者,并與臨床活動(dòng)性評(píng)分(CAS)呈正相關(guān),提示Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子可能在GO的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,可望作為評(píng)價(jià)GO患者病情活動(dòng)性的新指標(biāo)。 第二章Graves眼病患者外周血Th17細(xì)胞相關(guān)基因IL-17、ROR γ t mRNA的表達(dá)及臨床意義 目的 研究Graves眼病患者外周血Thl7細(xì)胞相關(guān)基因IL-17、ROR γ t mRNA的表達(dá)及其在疾病不同時(shí)期的差異,并分析臨床相關(guān)性,從而進(jìn)一步探討Th17細(xì)胞在Graves眼病發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法 (1)選取未經(jīng)治療的Graves眼病患者(GO組)40例,根據(jù)臨床活動(dòng)性評(píng)分(CAS)將Graves眼病患者分為活動(dòng)性GO組20例(CAS≥3),非活動(dòng)性GO組20例(CAS3)；同時(shí)選取同期未經(jīng)治療的非突眼Graves病患者(GD組)20例及健康體檢的正常對(duì)照組20例。 (2)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)外周血單核細(xì)胞(PBMC)中IL-17、ROR γt mRNA的表達(dá)水平,并分別與CAS評(píng)分、突眼度、FT3、FT4、TSH、TRAb等臨床或?qū)嶒?yàn)室指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。 (3)統(tǒng)計(jì)分析方法：采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組資料之間的比較采用單因素方差分析,方差齊時(shí),多重比較采用LSD法,方差不齊時(shí)進(jìn)行Welch法校正,采用Dunnett's T3法進(jìn)行組間多重比較。正態(tài)分布資料的相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析,不符合正態(tài)分布的資料用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 GO組和GD組患者外周血PBMC中IL-17、RORγt mRNA的表達(dá)水平均高于正常對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且活動(dòng)性GO組患者IL-17、RORγt mRNA的表達(dá)水平高于非活動(dòng)性GO組和GD組(P0.05),而非活動(dòng)性GO組患者外周血PBMC中IL-17、RORγt mRNA的表達(dá)水平與GD組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 相關(guān)性檢驗(yàn)分析顯示RORγt與IL-17mRNA表達(dá)水平呈正相關(guān),GO組患者RORγt、IL-17mRNA表達(dá)與臨床活動(dòng)性評(píng)分(CAS)呈正相關(guān)(P0.05),而與突眼度、驗(yàn)室檢查指標(biāo)(FT3、FT4、TSH、TRAb)之間均無(wú)顯著性關(guān)聯(lián)(P0.05)。 結(jié)論 GO組患者PBMC中IL-17、RORγt mRNA的表達(dá)水平高于正常對(duì)照組,且活動(dòng)期患者高于非活動(dòng)期患者,并與臨床活動(dòng)性評(píng)分(CAS)呈正相關(guān),提示IL-17、RORγtmRNA的上調(diào)與GO的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。 第三章甲基強(qiáng)的松龍對(duì)活動(dòng)性Graves眼病外周血Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的影響 目的 本研究通過(guò)在體外觀察不同劑量甲強(qiáng)龍對(duì)活動(dòng)性Graves眼病患者Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的影響,為臨床使用甲強(qiáng)龍治療活動(dòng)性Graves眼病提供新的理論依據(jù)。 方法 (1)選取未經(jīng)治療的活動(dòng)性Graves眼病患者及同期正常健康對(duì)照者各5例,分離PBMC,體外予不同濃度(0,1,5,25,125ug/m1)甲強(qiáng)龍培養(yǎng)12h,收集培養(yǎng)液上清。 (2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)甲強(qiáng)龍作用后的單核細(xì)胞(PBMC)中Th17細(xì)胞的比例,雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)培養(yǎng)液上清中IL-17的表達(dá)水平。 (3)統(tǒng)計(jì)分析方法：本實(shí)驗(yàn)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。常規(guī)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),正態(tài)性檢驗(yàn)。計(jì)量資料實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,單變量?jī)山M資料之間的比較采用t檢驗(yàn),綜合不同組不同濃度甲強(qiáng)龍作用后的測(cè)量數(shù)據(jù)的比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析。以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 (1)經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析,結(jié)果顯示活動(dòng)性GO組和正常對(duì)照組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=402.728,P0.001),不同濃度組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=50.870,P0.001),分組與濃度之間有交互作用(F=4.208,P0.001),提示不同組隨著甲強(qiáng)龍濃度的增加,Thl7細(xì)胞的比例變化趨勢(shì)不同。進(jìn)一步對(duì)單獨(dú)效應(yīng)進(jìn)行分析,結(jié)果顯示兩組在不同濃度甲強(qiáng)龍作用后差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),兩組內(nèi)不同濃度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。不同濃度(0,1,5,25,125ug/m1)甲強(qiáng)龍?bào)w外作用于活動(dòng)性GO患者PBMC時(shí),25、125ug/ml濃度組對(duì)Th17細(xì)胞有抑制作用,其余各濃度組均無(wú)抑制作用；甲強(qiáng)龍作用于正常對(duì)照組PBMC時(shí),25,125ug/ml濃度組對(duì)Th17細(xì)胞有抑制作用。且甲強(qiáng)龍對(duì)Th17細(xì)胞的抑制作用隨甲強(qiáng)龍濃度的增加而增強(qiáng)。 (2)重復(fù)測(cè)量方差分析結(jié)果顯示活動(dòng)性GO組培養(yǎng)液上清IL-17水平高于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=392.181,P0.001),不同濃度組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=28.691,P0.001),分組與濃度之間存在交互作用(F=6.705,P0.001),提示不同組隨著甲強(qiáng)龍濃度的增加,培養(yǎng)液上清IL-17變化趨勢(shì)不同,進(jìn)一步對(duì)單獨(dú)效應(yīng)進(jìn)行分析,結(jié)果顯示兩組在不同濃度甲強(qiáng)龍作用后差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),兩組內(nèi)不同濃度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。除甲強(qiáng)龍1ug/ml濃度組對(duì)活動(dòng)性GO患者PBMC培養(yǎng)液上清IL-17的表達(dá)無(wú)抑制作用,其余各濃度組甲強(qiáng)龍?bào)w外均有抑制作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。甲強(qiáng)龍25、125ug/ml濃度組對(duì)正常對(duì)照組患者PBMC培養(yǎng)液上清IL-17的表達(dá)有抑制作用,其余各濃度組均無(wú)抑制作用(P0.05)。 結(jié)論 甲強(qiáng)龍可抑制活動(dòng)性Graves眼病的PBMC分泌IL-17水平和Thl7細(xì)胞的表達(dá),此研究為糖皮質(zhì)激素甲強(qiáng)龍的臨床應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R771.3

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2 閆建飛;誤事 誤人 誤己的“白眼病”[N];遼源日?qǐng)?bào);2007年

3 丁欣;患眼病少吃辛辣[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

4 曹霞;某些眼病與用藥有關(guān)[N];中國(guó)消費(fèi)者報(bào);2002年

5 寧蔚夏;游泳防眼病[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

6 鐘肇鑫;當(dāng)心，吃藥吃出眼病[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

7 鐘肇鑫;當(dāng)心吃藥吃出眼病[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

8 徐潔;老人眼病用灸法[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2006年

9 記者 管煒 通訊員 張懋;霍市青少年眼病防治中心成為“全國(guó)學(xué)生愛(ài)眼工程”旗縣級(jí)合作單位[N];通遼日?qǐng)?bào);2008年

10 上海交大醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院眼科 亢曉麗 岑潔;兒童常得哪些眼病[N];健康報(bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李琳娜;Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在Graves眼病中的作用及機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

2 張磊;雌激素受體基因多態(tài)性與女性Graves眼病的關(guān)系研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

3 王少蓮;怒及其相關(guān)心理、體質(zhì)因素在Graves甲亢發(fā)病中的作用[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2012年

4 陳繼東;Graves病證候與基因多態(tài)性的相關(guān)研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2010年

5 周國(guó)義;加味參脈散對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)癥（Graves�。┑呐R床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

6 李健榕;Th17在難治性Graves病中的作用機(jī)制[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

7 左新河;復(fù)方甲亢片治療Graves亞臨床甲亢狀態(tài)的療效相關(guān)因素及機(jī)理研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2010年

8 鄭薇;小鼠Graves病模型構(gòu)建及~(131)I、抗ICAM-1單抗治療實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

9 林愛(ài)珍;益氣養(yǎng)陰方對(duì)Graves病小鼠白細(xì)胞保護(hù)作用及其機(jī)制的研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2010年

10 謝三祥;Th1和Th17細(xì)胞在口腔扁平苔蘚中的致病機(jī)制的初步研究[D];華中科技大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 南金延;檢測(cè)鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8自身抗體對(duì)Graves病及Graves眼病的臨床意義的初步研究[D];吉林大學(xué);2013年

2 趙建宇;橋本甲狀腺炎和Graves病患者Th17細(xì)胞的檢測(cè)及意義[D];吉林大學(xué);2012年

3 李強(qiáng);氧化應(yīng)激上調(diào)IL-17在Graves眼病的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

4 孫媛媛;TSHR基因內(nèi)含子1區(qū)域基因多態(tài)性與Graves病的相關(guān)性研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2012年

5 周喜娜;Th17細(xì)胞與Graves病的相關(guān)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

6 李花英;Graves病患者血清丙二醛、髓過(guò)氧化物酶及抗氧化能力指標(biāo)的觀察[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

7 鄭麗娟;Graves病血清成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21水平變化及其影響因素的探討[D];中南大學(xué);2011年

8 趙萍;Graves病患者生命質(zhì)量與影響因素探討[D];中南大學(xué);2011年

9 陳雪靜;憤怒郁怒誘發(fā)Graves病不同反應(yīng)機(jī)制的心理干預(yù)研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2011年

10 劉靜;血清硒水平與Graves病復(fù)發(fā)的關(guān)系及機(jī)制探討[D];山東大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1513637