本文關(guān)鍵詞： 磷酸果糖激酶1 鼻咽癌 糖酵解途徑 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 鼻咽癌 糖酵解 磷酸果糖激酶1 RNA干擾　出處：《華中科技大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分鼻咽癌組織中磷酸果糖激酶1的表達(dá)及其酶活性檢測 目的：檢測鼻咽部正常組織、癌組織中糖酵解途徑關(guān)鍵限速酶-磷酸果糖激酶1(phosphofructokinasel, PFK1)的mRNA和蛋白表達(dá)水平及其酶活性,分析磷酸果糖激酶1與鼻咽癌生物學(xué)特性的關(guān)系。 方法：采用病例-對照設(shè)計(jì)的方法,鼻咽癌組織活檢標(biāo)本來自41位鼻咽癌的患者,對照組活檢標(biāo)本來自20位鼻咽部慢性炎癥的患者鼻咽部組織,采取實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢查PFK1mRNA的表達(dá)水平,采取免疫印跡法(Western-blot)檢測PFK1蛋白的表達(dá)；酶學(xué)分析的方法檢測PFK1酶活性。 結(jié)果：在鼻咽部的活檢標(biāo)本中,①鼻咽癌組中的PFK1mRNA表達(dá)水平、蛋白表達(dá)水平及其酶活性均明顯高于鼻咽部慢性炎性組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),②在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組中PFK1mRNA表達(dá)水平、蛋白表達(dá)水平及其酶活性均明顯高于無伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論：PFK1與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),可能作為鼻咽癌的分子標(biāo)志物之一,特異性抑制PFK1有可能成為治療鼻咽癌的新策略。 第二部分RNA干擾靶向沉默磷酸果糖激酶1的表達(dá)對鼻咽癌細(xì)胞株CNE2生物學(xué)特性的影響 目的：惡性腫瘤細(xì)胞糖酵解途徑增強(qiáng),而磷酸果糖激1(phosphofructokinasel,PFK1)是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶,本研究通過構(gòu)建shRNA-PFK1質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE2細(xì)胞,分析鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)特性的變化。 方法：構(gòu)建4條shRNA-PFK1質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染質(zhì)粒至鼻咽癌CNE2細(xì)胞中,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (real time quantitative PCR, RT-PCR)檢測不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后PFK1mRNA的表達(dá)變化,將抑制效率最高的shRNA-PFK1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CNE2細(xì)胞,RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染前后PFK1mRNA表達(dá)的變化,免疫印跡法(Western-blot)檢測PFK1蛋白表達(dá)的變化,酶學(xué)分析的方法檢測PFK1酶活性的變化, MTT法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖能力的變化,流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡變化,細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞體外遷移能力的變化,Transwell細(xì)胞侵襲試驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞體外侵襲能力的變化。 結(jié)果：4條shRNA-PFK1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE2細(xì)胞后,質(zhì)粒sh-H-PFK1-507的2-ΔΔCT值較其余3條質(zhì)粒及空白對照組、質(zhì)粒對照組小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),有抑制作用,且抑制效率最高。實(shí)驗(yàn)組CNE2細(xì)胞在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染質(zhì)粒sh-H-PFK1-507后PFK1mRNA表達(dá)量與空白對照組、質(zhì)粒對照組相比顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),PFK1蛋白表達(dá)量與其他兩組相比顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),PFK1酶活性與其他兩組相比顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組在24h、36h、48h、72h的吸光度值明顯低于其他兩組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖能力收到抑制。實(shí)驗(yàn)組與空白對照組、質(zhì)粒對照組相比凋亡比例明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞體外遷移能力明顯低于空白對照組與質(zhì)粒對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞體外侵襲能力明顯低于空白對照組與質(zhì)粒對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論：shRNA-PFK1通過抑制鼻咽癌細(xì)胞PFK1的表達(dá),進(jìn)而抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖能力、體外遷移能力和侵襲能力并促進(jìn)細(xì)胞凋亡,可能成為治療鼻咽癌的新策略。
[Abstract]:Expression of phosphofructokinase 1 and its enzyme activity in the first part of nasopharyngeal carcinoma Objective : To detect the mRNA and protein expression level of phosphofructokinase 1 ( PFK1 ) and its enzyme activity in normal tissues and cancerous tissues of nasopharyngeal carcinoma , and to analyze the relationship between phosphofructokinase 1 and biological characteristics of nasopharyngeal carcinoma . Methods : A case - control method was used to study the expression of PFK1 mRNA in nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) from 41 patients with nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) and control group . The expression level of PFK1mRNA was examined by real - time quantitative PCR ( RT - PCR ) . Western - blot was used to detect PFK1 protein expression . Results : 鈶，

本文編號：1486664