本文關(guān)鍵詞： 鼻咽癌 血清 乙腈 SELDI-TOF-MS MALDI-TOF-MS/MS　出處：《廣西醫(yī)科大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的: 1、建立鼻咽癌血清蛋白質(zhì)組研究中高豐度大分子蛋白質(zhì)的去除和小分子蛋白質(zhì)/多肽的富集方法。 2、建立乙腈處理后鼻咽癌患者與正常人血清蛋白質(zhì)的表達譜,篩選鼻咽癌差異蛋白質(zhì),為獲得鼻咽癌相關(guān)血清標志蛋白質(zhì)提供新的方法。 3、初步分離10kDa以下的蛋白質(zhì)條帶,分析與鑒定可能與鼻咽癌相關(guān)的差異蛋白質(zhì)。 方法: 1、應(yīng)用不同倍數(shù)(1.5:1,1.2:1)的乙睛去除鼻咽癌血清中的高豐度蛋白質(zhì),通過Tricine-SDS-PAGE電泳比較高豐度蛋白質(zhì)的去除和低豐度蛋白質(zhì)/多肽的富集情況,選擇最合適的乙腈處理倍數(shù)用于質(zhì)譜分析和差異蛋白質(zhì)的篩選研究。 2、SELDI-TOF-MS技術(shù)和弱陽離子蛋白質(zhì)芯片(CM10)分析乙腈處理后鼻咽癌患者與正常人血清的蛋白質(zhì)譜,篩選差異蛋白質(zhì),并與原始鼻咽癌患者和正常人血清之間的差異蛋白質(zhì)比較,尋找相同的差異蛋白質(zhì)。 3、通過Tricine-SDS-PAGE電泳,切膠分離乙腈處理的鼻咽癌患者血清中小于10kDa的小分子蛋白質(zhì)/多肽,SELDI-TOF-MS確認差異蛋白質(zhì)峰、MALDI-TOF-MS/MS鑒定蛋白質(zhì)條帶,尋找和鑒定可能與鼻咽癌相關(guān)的差異蛋白質(zhì)。 結(jié)果: 1、Tricine-SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,乙睛沉淀法能夠去除鼻咽癌血清中大部分高豐度蛋白質(zhì),同時也能夠富集低豐度小分子蛋白質(zhì)/多肽,特別是10kDa以下的蛋白質(zhì)條帶清晰可見。 2、SELDI-TOF-MS技術(shù)和CM10蛋白質(zhì)芯片分析乙腈處理的鼻咽癌患者血清,結(jié)果顯示,蛋白質(zhì)譜峰荷質(zhì)比范圍2000~20,000m/z、首次噪音過濾值5 S/N(Signal / Noise)、峰群出現(xiàn)頻率15%、二次噪音過濾值2 S/N、峰值波動范圍±0.3%(m/z)的標準化設(shè)定條件下,共檢測到蛋白質(zhì)(或多肽)峰80個,其分布落在分子量為6,000Da~10,000Da范圍的占26.2%,分子量10,000Da的占37.5%,峰值強5的蛋白質(zhì)峰占率13.8%;與同樣經(jīng)乙腈處理過的正常人血清蛋白質(zhì)譜比較(P0.05且各蛋白質(zhì)峰值的MeanSD)共發(fā)現(xiàn)13個差異蛋白質(zhì)峰,其中5個表達上調(diào)(5638.8、8480.3、8579.0、8705.1、13772.8Da),8個表達下調(diào)。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn),乙腈處理的鼻咽癌患者與正常人血清之間的5個表達上調(diào)的差異蛋白質(zhì)中,其中4個在原始鼻咽癌患者和正常人血清之間的差異蛋白質(zhì)中存在。表達下調(diào)的差異蛋白質(zhì)在乙腈處理與非處理的鼻咽癌血清蛋白質(zhì)譜中不盡相同。 3、經(jīng)SELDI-TOF-MS確認差異蛋白峰和MALDI-TOF-MS/MS分析蛋白條帶發(fā)現(xiàn),其中8705.1Da的差異蛋白質(zhì)峰可能是載脂蛋白C III( ApoC-III)。 結(jié)論: 1、在蛋白質(zhì)譜峰荷質(zhì)比范圍2000~20,000m/z內(nèi),乙腈處理與原始的鼻咽癌血清蛋白質(zhì)譜存在一定的差異:原始的鼻咽癌血清蛋白質(zhì)峰大多集中在6,000Da以下,而6,000Da的蛋白質(zhì)峰在乙腈處理的鼻咽癌血清中發(fā)現(xiàn)率提高,占總蛋白質(zhì)峰的一半以上(26.2%+37.5%);多數(shù)表達上調(diào)的差異蛋白質(zhì)在乙腈處理和原始鼻咽癌血清中同時發(fā)現(xiàn),但前者峰值強度增高。 2、乙腈沉淀去除血清中高豐度大分子蛋白質(zhì)和富集小分子蛋白質(zhì)的方法有效,值得在血清蛋白質(zhì)組學研究中應(yīng)用,并有可能更簡單地獲得其中有意義的差異蛋白質(zhì)。
[Abstract]:Objective:
1, the removal of high abundance macromolecular protein and the enrichment of small molecular protein / polypeptide in the study of serum proteome of nasopharyngeal carcinoma were established.
2, we established the expression profiles of serum proteins in patients with nasopharyngeal carcinoma and normal controls after the treatment of acetonitrile, and screened the differential proteins of nasopharyngeal carcinoma, so as to provide a new method for obtaining nasopharyngeal carcinoma related serum marker proteins.
3, we preliminarily separate the protein bands below 10kDa, and analyze and identify the differential proteins that may be associated with nasopharyngeal carcinoma.
Method:
1, the application of different ratio (1.5:1,1.2:1) of acetonitrile removal of high abundance proteins in serum of nasopharyngeal carcinoma by Tricine-SDS-PAGE electrophoresis, the relatively high abundance protein removal and low abundance proteins / peptides enrichment, screening of protein mass spectrometry analysis and differential treatment for multiple acetonitrile the most appropriate choice.
2, SELDI-TOF-MS technology and weak cation exchange (CM10) analysis of proteins in patients with nasopharyngeal carcinoma and normal human serum acetonitrile treatment, screening differential proteins, and protein differences between serum and original nasopharyngeal carcinoma patients and normal people are looking for the same, the difference of protein.
3,閫氳繃Tricine-SDS-PAGE鐢墊吵,鍒囪兌鍒嗙涔欒厛澶勭悊鐨勯薊鍜界檶鎮(zhèn)ｈ，

本文編號：1485926