本文關(guān)鍵詞： 益氣解毒方 微小RNA 鼻咽癌 腫瘤干細(xì)胞 干預(yù)效應(yīng)　出處：《湖南中醫(yī)藥大學(xué)》2013年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：[研究背景] 益氣解毒方對(duì)鼻咽癌細(xì)胞以及其裸鼠移植瘤均具有較強(qiáng)的抑制作用,聯(lián)合運(yùn)用順鉑能進(jìn)一步增強(qiáng)其抑瘤率,有效提高荷瘤裸鼠治療后的生存質(zhì)量。益氣解毒方可通過激活DC而增強(qiáng)T細(xì)胞的增殖反應(yīng),強(qiáng)化CTL對(duì)鼻咽癌靶細(xì)胞的殺傷活性。腫瘤干細(xì)胞是腫瘤中具有自我更新能力并能產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞的瘤細(xì)胞群體。盡管腫瘤干細(xì)胞數(shù)目很少,卻具有強(qiáng)大的惡性增殖能力,決定了腫瘤生長(zhǎng)速度及治療后復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移潛能。若要徹底治愈腫瘤,必須清除這類細(xì)胞。迄今為止,研究鼻咽癌干細(xì)胞的報(bào)道卻不多。miRNA是由一類內(nèi)源性具有調(diào)控功能的非編碼RNA,與靶基因的3’UTR區(qū)結(jié)合后,在轉(zhuǎn)錄后水平抑制蛋白的翻譯而發(fā)揮負(fù)調(diào)控靶基因表達(dá)的作用。 本課題運(yùn)用益氣解毒方藥物血漿分別處理鼻咽癌干細(xì)胞CNE2-SC(CNE2-SC/QBTRF)和對(duì)照細(xì)胞CNE2-SC/control,然后進(jìn)行miRNA芯片分析,篩選受益氣解毒方調(diào)控的差異miRNA,從miRNA角度探討益氣解毒方殺滅鼻咽癌干細(xì)胞以及抑制鼻咽癌腫瘤生長(zhǎng)增殖與侵襲的作用。 [CD133和CD44在鼻咽癌不同臨床進(jìn)展階段的表達(dá)分析] 許多文獻(xiàn)提示,CD133和CD44與多種腫瘤的發(fā)生有關(guān),是多種腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物。因此,我們選擇這兩個(gè)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物在鼻咽癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)活性進(jìn)行驗(yàn)證與分析。首先采用免疫組化分析CD133、CD44在鼻咽癌組織中的表達(dá)活性改變與鼻咽癌臨床進(jìn)展階段的相關(guān)性。結(jié)果顯示,CD133和CD44在鼻咽癌腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于正常鼻咽上皮,且與臨床分期相關(guān)。緊接著,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)與干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)檢測(cè)益氣解毒方對(duì)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD44的表達(dá)活性的影響以及對(duì)鼻咽癌干細(xì)胞CNE2-SC的殺傷作用。結(jié)果顯示,益氣解毒方可顯著抑制鼻咽癌干細(xì)胞CNE2-SC的成球能力,并下調(diào)CD133的表達(dá)水平,但對(duì)CD44表達(dá)活性無顯著作用。 [益氣解毒方調(diào)控的差異miRNA在鼻咽癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)活性檢測(cè)] miRNA芯片結(jié)果經(jīng)qRT-PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),益氣解毒方處理鼻咽癌干細(xì)胞CNE2-SC后,表達(dá)活性上調(diào)2倍以上的miRNA有4個(gè)(miR-200b, miR-29b, miR-34a, miR-101).運(yùn)用qRT-PCR檢測(cè)益氣解毒方上調(diào)的miRNA在鼻咽癌細(xì)胞中的表達(dá),以正常鼻咽上皮細(xì)胞NP-69為對(duì)照,結(jié)果顯示,miR-200b在鼻咽癌CNE2、CNE1、6-10B、5-8F細(xì)胞中的表達(dá)活性都出現(xiàn)下調(diào),且miR-200b在鼻咽癌干細(xì)胞CNE2-SC幾乎不表達(dá)。于是選擇miR-200b在53例鼻咽癌組織中進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。qRT-PCR結(jié)果顯示,miR-200b在鼻咽癌組織中表達(dá)顯著下調(diào),且隨著鼻咽癌的臨床進(jìn)展而進(jìn)一步下調(diào)。這些結(jié)果提示,miR-200b可能作為抑瘤miRNA參與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也證實(shí),益氣解毒方可顯著上調(diào)CNE2鼻咽癌細(xì)胞裸鼠移植瘤組織中miR-200b的表達(dá)水平。因此,益氣解毒方可能通過上調(diào)miR-200b的表達(dá)殺滅腫瘤干細(xì)胞,進(jìn)而抑制鼻咽癌的生長(zhǎng)增殖速度與侵襲潛能。[miR-200b是鼻咽癌治療的潛在生物靶點(diǎn),miR-200b通過抑制靶基因CD133殺滅鼻咽癌干細(xì)胞,抑制鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖與侵襲潛能,對(duì)鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程發(fā)揮重要的影響] miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可充當(dāng)抑瘤基因的作用。干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)證實(shí),miR-200b能抑制鼻咽癌干細(xì)胞CNE2-SC的成球能力。MTT、Transwell等實(shí)驗(yàn)證實(shí),miR-200b可以抑制鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷徙和侵襲能力,而干擾miR-200b則能促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)和侵襲能力；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,miR-200b可以抑制CNE2鼻咽癌細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)速率；因而,miR-200b在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮抑瘤基因的作用。為進(jìn)一步闡明其作用機(jī)制,我們運(yùn)用生物信息學(xué)以及相應(yīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí),miR-200b可抑制靶基因CD133的表達(dá),并能下調(diào)鼻咽癌干細(xì)胞CNE2-SC中CD133的表達(dá)活性水平；而干擾miR-200b則能拮抗益氣解毒方對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的抑制效應(yīng)。因此,miR-200b可能是鼻咽癌治療的潛在生物靶點(diǎn)。 總之,鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多階段變異累積形成的病理過程。miRNA、基因、腫瘤干細(xì)胞等在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色,它們相互作用,進(jìn)而構(gòu)成鼻咽癌發(fā)生發(fā)展過程中的復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)路。闡明益氣解毒方通過miR-200b參與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,能為鼻咽癌的診斷、預(yù)后評(píng)估提供檢測(cè)分子標(biāo)記,為鼻咽癌的臨床治療提供有效靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.63

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