本文關(guān)鍵詞：Notch信號(hào)對(duì)高糖誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用　出處：《眼科新進(jìn)展》2015年09期 　論文類(lèi)型：期刊論文

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【摘要】：目的探討Notch1信號(hào)對(duì)高糖情況下多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1[Poly(ADPribose)polymeras-1,PARP-1]和核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的p50亞單位(NF-κB50)介導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞(retinal vascular endothelial cells,RVECs)凋亡的抑制作用。方法體外培養(yǎng)人RVECs及HEK293T細(xì)胞,并進(jìn)行傳代,同時(shí)構(gòu)建高糖(葡萄糖濃度為30 mmol·L-1)人RVECs細(xì)胞模型。構(gòu)建p CMV-ScriptNotch1和p CMV-Script-DLL4質(zhì)粒,酶切鑒定后Western Blot法檢測(cè)重組質(zhì)粒表達(dá)目的基因的效果,同時(shí)合成si Notch1并轉(zhuǎn)染高糖培養(yǎng)的人RVECs,Western Blot法檢測(cè)Notch基因敲除效果。應(yīng)用免疫共沉淀及Western Blot法檢測(cè)si Notch1對(duì)高糖下PARP-1和NF-κB的相互作用的影響;應(yīng)用Western Blot法檢測(cè)高糖條件下Notch1/DLL4上調(diào)和下調(diào)后人RVECs中PARP-1、p-AKT、NF-κB50及caspase-3的表達(dá)變化。結(jié)果人RVECs復(fù)蘇后24 h貼壁,細(xì)胞呈扁平梭形,3 d左右細(xì)胞開(kāi)始融合呈鋪路石樣,單層生長(zhǎng),鋪滿瓶底,并可見(jiàn)接觸抑制現(xiàn)象。免疫共沉淀結(jié)果顯示高糖組培養(yǎng)的人RVECs其PARP-1結(jié)合的NF-κB50的量較正常對(duì)照組增加;將si Notch1轉(zhuǎn)染高糖組培養(yǎng)的人RVECs后或同時(shí)加入DLL4,則人RVECs中PARP-1結(jié)合的NF-κB50的量較前增加顯著,提示Notch能抑制高糖下PARP-1和NF-κB50的相互作用。Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示高糖條件下,Notch1和DLL4上調(diào)后其PARP-1及caspase-3表達(dá)量較前顯著降低;Notch1下調(diào)后其PARP-1及caspase-3表達(dá)量較前增加;p-AKT表達(dá)量則相反;提示Notch信號(hào)能抑制高糖誘導(dǎo)的PARP-1及caspase-3的激活及表達(dá)。結(jié)論高糖情況下Notch信號(hào)可調(diào)控PARP-1和NF-κB的相互作用,并抑制PARP-1激活引起的人RVECs的凋亡。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of Notch1 signal on high glucose conditions of poly adenosine diphosphate ribose polymerase two -1[Poly (ADPribose) polymeras-1, PARP-1] and nuclear factor kappa B (nuclear factor kappa B, NF- K B) subunit P50 (NF- K B50) mediated human retinal vascular endothelial cells (retinal vascular endothelial cells, RVECs) inhibition the role of apoptosis in cultured human RVECs cells and HEK293T cells. Methods in vitro, were constructed at the same time, high glucose (glucose concentration of 30 mmol L-1) RVECs cell model. To construct P CMV-ScriptNotch1 and P CMV-Script-DLL4 plasmid, restriction endonuclease gene expression effect detection of recombinant plasmid Western after Blot, and Si Notch1 and transfection synthesis high glucose cultured human RVECs Notch Western Blot, the detection method of gene knockout effect. The interaction of Si Notch1 detection by CO immunoprecipitation and Western Blot method of PARP-1 and NF- under high glucose kappa B. The application of Western in high glucose condition detection noise; Blot method under Notch1/DLL4 and downregulation of PARP-1, human RVECs p-AKT, expression of NF- K B50 and caspase-3. Results the RVECs recovery after 24 h of adherent cells were spindle shaped, flat, about 3 D cell fusion cobblestone monolayer, long and covered the bottom of the bottle visible, and contact inhibition. The results showed that high glucose group of cultured human RVECs PARP-1 binding NF- kappa B50 was increased compared with normal control group co immunoprecipitation; Si high glucose group Notch1 transfection of cultured human RVECs or after we joined DLL4, PARP-1 combination of NF- kappa B50 in human RVECs than before a significant increase in the interaction of.Western Blot, suggesting that the detection result of Notch can inhibit high glucose PARP-1 and NF- kappa B50 showed high glucose conditions, the PARP-1 and Caspase-3 expression was significantly decreased Notch1 and DLL4 increased; the expression of PARP-1 and caspase-3 Notch1 down The amount of p-AKT increased. The expression of Notch was opposite. It suggested that the PARP-1 signal and caspase-3 activation and expression could be inhibited by high glucose. Conclusion Notch signaling can regulate the interaction between PARP-1 and NF- kappa B and inhibit the apoptosis of human RVECs induced by PARP-1.

【作者單位】： 大連市大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科;上海交通大學(xué)附屬上海市第一人民醫(yī)院眼科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(編號(hào):81300737)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2;R774.1
【正文快照】： 糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病晚期眼部并發(fā)癥,也是目前我國(guó)主要致盲性眼病之一[1]。DR在糖尿病剛開(kāi)始的幾年里很少發(fā)生,其發(fā)病率在第10年時(shí)增加至50%,第25年則可達(dá)90%[2]。在我國(guó),糖尿病的發(fā)生率逐年增高,而DR的發(fā)生率也逐年增高,DR在糖尿病患者中的發(fā)

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1394298