本文關(guān)鍵詞：miR-184在堿燒傷角膜新生血管中的表達(dá)和功能研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 角膜新生血管 體外血管新生 靶基因預(yù)測(cè) 透明角膜 microRNA分子

【摘要】：目的：探討miR-184在堿燒傷誘導(dǎo)角膜新生血管形成過程中的表達(dá)變化和作用機(jī)制，及其對(duì)體外血管新生的影響。方法：堿燒傷誘導(dǎo)大鼠角膜新生血管形成，基質(zhì)膠上建立人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞體外三維培養(yǎng)體系，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)miR-184的體內(nèi)外表達(dá)。生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)并分析miR-184靶基因。體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染miR-184mimic進(jìn)入細(xì)胞中，應(yīng)用MTT、Transwell檢測(cè)方法分別觀察轉(zhuǎn)染后血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移能力的變化，，同時(shí)觀察miR-184對(duì)基質(zhì)膠上細(xì)胞體外管腔形成能力的影響。結(jié)果：初步建立起血管新生的體內(nèi)外研究模型，miR-184在堿燒傷大鼠角膜新生血管角膜中的表達(dá)（0.145±0.013）較正常角膜(1.015±0.189)顯著下降(P＜0.01),而在人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中相對(duì)表達(dá)量極少（0.007±0.004）(P＜0.05)。預(yù)測(cè)的的靶基因與VEGF血管生成信號(hào)通路有關(guān)。miR-184mimic有效轉(zhuǎn)染入人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染后48h細(xì)胞光密度值（0.50±0.039）和轉(zhuǎn)染后24h細(xì)胞遷移過膜數(shù)（55.4±5.857）均較對(duì)照組明顯減少（P＜0.01），形成管腔樣結(jié)構(gòu)分支點(diǎn)數(shù)（13.33±2.082）較對(duì)照組明顯減少（P＜0.05）。結(jié)論：新生血管進(jìn)程中伴隨著miR-184表達(dá)量降低，miR-184能抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)和無血清誘導(dǎo)的遷移能力，減弱內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)膠上體外管腔形成能力，可能通過VEGF血管生成信號(hào)通路參與調(diào)控血管新生和維持角膜的透明無血管狀態(tài)。
[Abstract]:Objective: to investigate the expression and mechanism of miR-184 in corneal neovascularization induced by alkali burn. Methods: the corneal neovascularization was induced by alkali burn and the three-dimensional culture system of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) was established on the matrix glue. The expression of miR-184 in vitro and in vivo was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The target gene of miR-184 was predicted and analyzed by bioinformatics. Human umbilical vein endothelial cells were cultured in vitro. After transfection of miR-184mimic into cells by liposome method, the changes of proliferation and migration ability of vascular endothelial cells were observed by MTTV-Transwell assay. At the same time, we observed the effect of miR-184 on the in vitro lumen formation of stromal cells. Results: an in vitro and in vivo model of angiogenesis was established. The expression of miR-184 in corneal neovascularization cornea after alkali burn was significantly lower than that in normal cornea (P < 0.01). However, the relative expression in human umbilical vein endothelial cells was very small (0.007 鹵0.004) (P < 0.05). The predicted target gene was related to the VEGF angiogenesis signaling pathway. MiR-1844 mimic was effectively transfected into human umbilical vein endothelial cells. The optical density of cells at 48 h after transfection was 0.50 鹵0.039) and the number of over membrane migration was 55.4 鹵5.857) at 24 h after transfection, which was significantly lower than that in the control group (P < 0.01). The number of branches forming luminal structure was 13.33 鹵2.082), which was significantly lower than that in control group (P < 0.05). Conclusion: the expression of miR-184 is decreased in the process of neovascularization. MiR-184 inhibited cell growth and serum-free migration, and weakened the ability of endothelial cells to form lumen on stroma in vitro. VEGF angiogenesis signaling pathway may be involved in the regulation of angiogenesis and the maintenance of a transparent and non-vascularized cornea.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R772.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1373741