本文關(guān)鍵詞：左卡尼汀對體外高糖培養(yǎng)鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的保護作用及機制探討　出處：《青島大學》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的探討左卡尼汀(L-carnitine, LC)對高糖損傷鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的保護作用及可能的機制。 方法選擇出生1-3d的SD大鼠,取視網(wǎng)膜,0.125%的胰蛋白酶消化制備單細胞懸液后進行體外培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡觀察細胞生長形態(tài),采用Thy1.1單克隆抗體和微管相差蛋白-2多克隆抗體(Map2)對培養(yǎng)4d的細胞進行鑒定。臺盼藍拒染實驗觀察不同濃度葡萄糖作用下視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞生長狀況,并計算細胞存活率。待細胞達80%融合時進行實驗分組如下：正常細胞培養(yǎng)組(對照組)、單純LC組、高糖損傷組、LC保護組、N-乙酰半胱氨酸(NAC), MTT法檢測各組細胞活力；流式細胞儀測各組細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平；Hoechst33342染色觀察各組細胞凋亡率；JC-1染色后采用流式細胞儀檢測各組細胞線粒體膜電位的變化。 結(jié)果體外培養(yǎng)細胞免疫熒光雙標鑒定顯示大部分為Thy1.1及Map2陽性。通過臺盼藍拒染實驗比較不同濃度葡萄糖及不同干預時間視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞存活率,最終選擇30mmol/L葡萄糖干預48h建立高糖損傷模型。MTT結(jié)果顯示高糖損傷組細胞活性顯著下降(P0.01),左卡尼汀保護組細胞活力較高糖組顯著提高(P0.01)。高糖損傷組ROS水平高于正常細胞組,差別有統(tǒng)計學意義(P0.01),LC保護組ROS水平顯著低于高糖損傷組(P0.01)。高糖損傷組Hoechst33342染色可見大量細胞出現(xiàn)凋亡的形態(tài)學改變(如細胞核致密濃染、核固縮、邊緣化等),細胞凋亡率顯著高于正常組(P0.01),LC保護組細胞凋亡率顯著低于高糖損傷組(P0.01)。高糖損傷組線粒體膜電位較正常細胞組顯著降低(P0.01),而Lc保護組較高糖損傷組線粒體膜電位顯著升高(P0.05)。 結(jié)論左卡尼汀對高糖引起的視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞氧化應激損傷具有保護作用,其保護機制可能與其增強細胞的抗氧化能力、抑制細胞凋亡及改善線粒體功能有關(guān)。
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R774.1

【參考文獻】

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本文編號：1313209