本文關(guān)鍵詞：AIF基因的能量代謝功能分析

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【摘要】：目的量化AIF基因在細(xì)胞能量代謝中的功能特性,探討該基因相關(guān)聽神經(jīng)病的分子致病機(jī)制。方法選擇第三代基因編輯工具CRISPR-Cas9技術(shù)結(jié)合陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù),快速實(shí)現(xiàn)對(duì)HELA細(xì)胞的AIF基因進(jìn)行敲除,并通過Western blot進(jìn)行蛋白表達(dá)分析,Sanger測序進(jìn)行基因型的分析,然后利用Oxygraph-2K對(duì)多個(gè)AIF基因敲除細(xì)胞系以及野生型細(xì)胞系進(jìn)行氧化供能的檢測,最后采用Graph Pad prism5.00進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果通過該方法獲得了多株AIF基因敲除細(xì)胞系,并發(fā)現(xiàn)野生型細(xì)胞系耗氧功能明顯強(qiáng)于AIF基因敲除細(xì)胞系。結(jié)論通過CRISPR-Cas9技術(shù)的應(yīng)用,本研究快速實(shí)現(xiàn)了AIF蛋白表達(dá)缺失細(xì)胞系和野生型細(xì)胞系在氧化呼吸方面的差異比較,間接量化了該基因缺失所導(dǎo)致的能量損失,能量供應(yīng)障礙可能是聽神經(jīng)病的致病機(jī)制之一。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院解放軍醫(yī)學(xué)院耳鼻咽喉頭頸外科解放軍耳鼻咽喉研究所;
【基金】：國家重大科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目(2014CB943001) 國家自然基金重大國際合作項(xiàng)目(81120108009) 全軍“十二五”重點(diǎn)項(xiàng)目(BWS11J026)聯(lián)合資助
【分類號(hào)】：R764
【正文快照】： 1980年,Worthington等報(bào)道了幾例表型罕見的聽力障礙病例,患者的ABR波形或閾值與其純音結(jié)果不符[1]。隨后,Krause等也報(bào)道了7例聽力正�；蛑卸葥p失,且無腦干損傷的患者,ABR的波形卻出現(xiàn)了Ⅲ波或V波缺失的病例[2]。1992年,顧瑞教授報(bào)道了十余例雙側(cè)感音神經(jīng)性聽力減退損失的病

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1305967