本文關(guān)鍵詞：光動(dòng)力療法對(duì)鼻咽癌細(xì)胞抑制作用的體外研究

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【摘要】：鼻咽癌（Nasopharyngeal Carcinomas,NPC)多發(fā)于我國兩廣，湖南等地區(qū)，是高發(fā)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率可高達(dá)30/10萬。由于腫瘤生長(zhǎng)部位比較隱蔽，難以發(fā)現(xiàn)，癥狀也不典型，因此在患者就醫(yī)時(shí)已為中晚期。在目前廣泛采用的放、化療為主的治療方法能使腫瘤患者的5年生存率達(dá)到70%左右，但是放化療的并發(fā)癥也同時(shí)嚴(yán)重影響著患者的生存率和生活質(zhì)量。因此，尋找一種新的治療方法來改善并提高患者的生存和生活質(zhì)量成為迫切需要。光動(dòng)力療法（photodynamic therapy,PDT)選擇性好，毒性低，起效快的特點(diǎn)越來越受到人們的重視，在臨床工作中也取得了一些成效和進(jìn)展。本研究選取5-氨基酮戊酸（5-ALA）作為光敏劑，采用低強(qiáng)度氦氖激光照射人鼻咽癌細(xì)胞CNE2，，檢測(cè)5-ALA為光敏劑的光動(dòng)力療法（5-ALA-PDT）對(duì)體外培養(yǎng)的人鼻咽癌細(xì)胞的損傷作用和作用方式。本研究的目的在于探討PDT對(duì)體外鼻咽癌細(xì)胞的影響，并為臨床治療提供理論依據(jù)。 第一部分5-ALA-PDT對(duì)體外人鼻咽癌細(xì)胞的作用 目的：研究5-ALA-PDT對(duì)體外培養(yǎng)的人鼻咽癌細(xì)胞有無抑制作用，以及5-ALA對(duì)細(xì)胞的暗毒性等。 方法： 1、細(xì)胞分組對(duì)照組（無5-ALA無血清孵育、無光照），單純激光照射組（無5-ALA無血清孵育、光照），單純光敏劑孵育組（5-ALA無血清孵育、無光照），實(shí)驗(yàn)組1（5-ALA孵育無血清、光照）,實(shí)驗(yàn)組2（5-ALA孵育加血清、光照）。 2、光鏡下觀察經(jīng)5-ALA-PDT后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化將各組細(xì)胞進(jìn)行倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)改變。 3、MTT細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)5-ALA對(duì)細(xì)胞的暗毒性、低強(qiáng)度激光單純輻照對(duì)細(xì)胞的影響、不同照射時(shí)間對(duì)細(xì)胞的影響、血清對(duì)5-ALA-PDT的影響以及5-ALA在細(xì)胞內(nèi)最大飽和度。 結(jié)果： 1、5-ALA-PDT后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化經(jīng)過PDT后即刻顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞變小，變圓，折光性變?nèi)�，光�?小時(shí)后細(xì)胞貼壁能力下降，細(xì)胞間隙增寬，核膜著色加深，核固縮。 2、MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力5-ALA-PDT對(duì)CNE2的抑制作用在照光時(shí)間上有依賴關(guān)系，照光時(shí)間越長(zhǎng)，抑制率越高；在5-ALA濃度上也有依賴關(guān)系，但是超過2.0mmol/L時(shí)，抑制率變化不明顯。單純激光照射對(duì)腫瘤細(xì)胞沒有殺傷作用。單純藥物組，即5-ALA孵育組，對(duì)細(xì)胞也無明顯影響。實(shí)驗(yàn)組2，即加血清組，與對(duì)照組比較無明顯區(qū)別。 結(jié)論： 1、PDT對(duì)腫瘤細(xì)胞起到了殺傷作用；光敏劑必須和光照結(jié)合在一起才能取得療效；血清對(duì)PDT的治療效果干擾作用很大，可以降低或者對(duì)抗光療的效果。 2、光敏劑在細(xì)胞內(nèi)有一個(gè)飽和度，飽和濃度為2mmol/L，細(xì)胞抑制率的大小對(duì)光照劑量的大小有依賴性；低強(qiáng)度氦氖激光照射對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞無損傷作用；光敏劑孵育對(duì)細(xì)胞沒有暗毒性；血清對(duì)5-ALA-PDT有明顯的抑制作用。 第二部分`探討5-ALA-PDT對(duì)鼻咽癌細(xì)胞抑制作用的途徑及對(duì)人端粒酶催化亞基（hTERT）、caspase9的影響 目的：檢測(cè)經(jīng)過5-ALA-PDT后鼻咽癌細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)量及鼻咽癌細(xì)胞受損傷的方式 方法： 1、細(xì)胞分組對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組（15s、30s、60s、120s、300s）； 2、熒光定量RT-PCR法檢測(cè)人端粒酶催化亞基（hTERT），caspase9的mRNA表達(dá)； 3、Hoechst33258細(xì)胞核DNA染色分析 結(jié)果： 1．在mRNA檢測(cè)水平上各組Caspase9均高于對(duì)照組；hTERT低于對(duì)照組的表達(dá)； 2．Hoechst33258細(xì)胞核DNA染色分析實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核或者細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)濃染致密的明亮藍(lán)色顆粒塊熒光，而其他各組細(xì)胞呈現(xiàn)彌散均勻的熒光，說明實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象比較明顯。 結(jié)論： 1.實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果提示5-ALA-PDT有效抑制了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且降低了細(xì)胞中端粒酶催化亞基hTERT的表達(dá)量，提示低強(qiáng)度激光照射對(duì)腫瘤細(xì)胞中的端粒酶活性有一定的抑制作用； 2.Hoechst33258細(xì)胞核DNA染色分析提示5-ALA-PDT抑制細(xì)胞的作用主要是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方式實(shí)現(xiàn)的。關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)熒光定量，Caspase9，hTERT，Hoechst33258
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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