本文關(guān)鍵詞：玻璃體腔注射重組腺相關(guān)病毒—人NADH脫氫酶4亞基的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：探索玻璃體腔注射腺相關(guān)病毒（AAV）介導(dǎo)基因人NADH脫氫酶4亞基（ND4）的劑量；評(píng)估重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的人NADH脫氫酶4亞基（rAAV-ND4）在兔眼中表達(dá)的有效性和安全性。 方法：將融合了線粒體定位序列（Mitochondrial Targeting Sequence,MTS）的人ND4的開放閱讀框整合到腺相關(guān)病毒（AAV）的衣核中；構(gòu)建載體AAV-ND4；將兔子分成三個(gè)處理組。并通過玻璃體腔注射的方法分別將0.1ml的AAV-ND4、0.1ml的AAV-GFP和0.1ml的PBS注射入兔眼中；通過結(jié)膜、角膜、晶狀體、視網(wǎng)膜、眼壓、閃光視覺誘發(fā)電位（Flash-visual evoked potential,F-VEP）、光學(xué)相干斷層成像（OpticalCoherence Tomography,OCT）對(duì)注射AAV-ND4基因的兔眼進(jìn)行安全性評(píng)估；通過實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time quantitative Polymerase Chain Reaction，，RT-PCR)、視網(wǎng)膜鋪片、免疫熒光、westernblot從mRNA和蛋白水平上對(duì)兔眼視網(wǎng)膜中ND4基因表達(dá)的檢測進(jìn)行有效性評(píng)估。 結(jié)果：在三個(gè)處理組進(jìn)行玻璃體腔注射后，沒有任何一只發(fā)生不良反應(yīng)；玻璃體腔注射一個(gè)月后，三個(gè)處理組的視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層的平均厚度沒有明顯差別；視覺誘發(fā)電位測試結(jié)果顯示三個(gè)處理組的P100波的潛伏期沒有明顯差別；實(shí)時(shí)定量PCR、視網(wǎng)膜鋪片、免疫熒光和westernblot顯示ND4和綠色熒光蛋白可以在視神經(jīng)纖維層表達(dá)。 結(jié)論：說明玻璃體腔注射腺相關(guān)病毒-人ND4基因是一個(gè)安全有效地操作；對(duì)玻璃體腔注射劑量和這種注射方式的探索對(duì)我們以后臨床上通過玻璃體腔注射腺相關(guān)病毒-人ND4基因治療Leber遺傳性視神經(jīng)病變提供一個(gè)很好的參考。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R774.6

【參考文獻(xiàn)】

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1 周暉暉;戴顯寧;林蓓;米慧;劉曉玲;趙福新;張娟娟;周翔天;孫艷紅;韋企平;瞿佳;管敏鑫;;7例攜帶線粒體tRNA~(Ala)C5601T突變的Leber遺傳性視神經(jīng)病變家系的相關(guān)研究[J];遺傳;2012年08期

本文編號(hào)：1259217