本文關(guān)鍵詞：bFGF對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞氯通道蛋白ClC-3表達(dá)的影響及其相關(guān)機(jī)制研究

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【摘要】：目的： 1、觀察堿性成纖維生長因子（bFGF）對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞（LECs）氯通道蛋白ClC-3的影響。 2、探討MAPK/ERK1/2、PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路在bFGF調(diào)節(jié)晶狀體上皮細(xì)胞ClC-3表達(dá)中的作用機(jī)制。 方法： 1、以體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞株HLE-B3為研究對(duì)象，常規(guī)培養(yǎng)的細(xì)胞作為空白對(duì)照組（control組），加入不同濃度（1,10,100ug/L）的bFGF進(jìn)行處理，RT-PCR法測(cè)定不同濃度及作用時(shí)間下LECs中ClC-3轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)變化。 2、免疫熒光及Western Blot法定位及半定量檢測(cè)不同濃度（1,10,100ug/L）的bFGF對(duì)人LECs ClC-3蛋白表達(dá)的影響。 3、 Western Blot法檢測(cè)不同濃度（1,10,100ug/L）的bFGF處理人晶狀體上皮細(xì)胞后，ERK1/2、AKT磷酸化水平的變化情況。 4、 Western Blot檢測(cè)細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK1/2)信號(hào)通路抑制劑PD98059和三磷酸肌醇激酶（PI3K/Akt）信號(hào)通路抑制劑LY294002作用于bFGF誘導(dǎo)的LECs增殖過程中ClC-3蛋白的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1、RT-PCR結(jié)果示：Control組表達(dá)少量ClC-3mRNA，不同濃度bFGF處理人LECs后，1、10ug/L bFGF處理組ClC-3mRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)，與control組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），其中10ug/L作用6h表達(dá)量最大。隨著濃度增加至100ug/L，ClC-3mRNA的表達(dá)則下降，與control組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 2、Western Blot檢測(cè)示bFGF處理組中ClC-3蛋白表達(dá)隨bFGF濃度的增大而增加，在10ug/L時(shí)表達(dá)量達(dá)到峰值，繼續(xù)增加濃度至100ug/L，其表達(dá)則下降。10ug/L bFGF組與其余各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。免疫熒光示ClC-3蛋白表達(dá)于人LECs的整個(gè)細(xì)胞中，且主要聚集在細(xì)胞核及其周圍。 3、不同濃度(1,10,100ug/L)bFGF處理人LECs6h后，Western Blot檢測(cè)示P-ERK1/2蛋白表達(dá)隨bFGF濃度的增大而增加，呈濃度依賴性。P-AKT蛋白隨bFGF濃度的增大而增加，在10ug/L時(shí)表達(dá)量達(dá)到峰值，繼續(xù)增加濃度表達(dá)則下降,10ug/L bFGF組與其余各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。非磷酸化ERK1/2、AKT變化不大。 4、信號(hào)通路抑制劑LY294002、PD98059與bFGF共同孵育人LECs后，顯示LY294002+bFGF聯(lián)合組、PD98059+bFGF聯(lián)合組較單用bFGF組ClC-3蛋白的表達(dá)明顯降低，兩者比較差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），，而單用LY294002、PD98059組與conrtol組相比ClC-3蛋白的表達(dá)相近，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論： 1、bFGF促進(jìn)人LECs增殖，1-10ug/L的bFGF能誘導(dǎo)ClC-3的表達(dá)，提示ClC-3與人晶狀體上皮細(xì)胞增殖過程密切相關(guān)。 2、MAPK/ERK1/2、PI3K/Akt信號(hào)通路均介導(dǎo)bFGF誘導(dǎo)的人LECs ClC-3表達(dá)的調(diào)控過程。其中，PI3K/Akt信號(hào)通路可能發(fā)揮主要作用。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R776


本文編號(hào)：1246558