本文關(guān)鍵詞：鼻咽癌特異性血清miRNA篩選與鑒定

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【摘要】：目的：本研究擬通過分析鼻咽癌患者和正常人血清miRNA表達(dá)譜的差異，篩選鼻咽癌特異性血清miRNA，并對篩選的miRNA進(jìn)行驗證，尋找差異表達(dá)的血清miRNA，為鼻咽癌的早期診斷、病情監(jiān)測以及疾病預(yù)后提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)，以期找到診斷和治療鼻咽癌的新思路。 方法： 第一部分：miRNA芯片篩選鼻咽癌血清表達(dá)差異miRNA （1）按照血清采集的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程收集鼻咽癌患者的血清和正常人血清標(biāo)本，掌握鼻咽癌患者的基本資料和臨床資料。所有患者和志愿者均知情同意并簽署知情同意書； （2）使用RNA提取試劑盒提取患者和志愿者的RNA； （3）使用分光光度計測量和評估RNA的純度和濃度； （4）選擇miRCURYTM Array Power試劑盒制備熒光標(biāo)記探針，并進(jìn)行芯片雜交和芯片信號掃描； （5）運用GenePix4000B芯片掃描熒光強(qiáng)度，用GenePix pro V6.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析； 結(jié)果： （1）收集了自桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2011年6月-2012年2月臨床病理學(xué)確診的鼻咽低分化鱗癌患者和健康志愿者的血清，初步建立了血清樣本庫； （2）提取的RNA純度和濃度檢測：提取血清RNA，光密度測定值A(chǔ)260/A2801.7，說明提取的血清RNA純度高，RNA量大于10ng符合基因芯片對標(biāo)本的要求。 （3）鼻咽癌患者血清miRNA2倍高于正常人的有54個，5倍高的有22個；2倍低于正常人血清的miRNA有88個，5倍低的有16個。 （4）鼻咽癌患者血清EBV相關(guān)miRNA2倍高于正常人血清EBV miRNA的有EBV-miR-BART4，EBV-miR-BART18-3p，EBV-miR-BART19-5和EBV-miR-BART21-3p等4個。 第二部分：實時熒光定量PCR鑒定miRNA芯片篩選的鼻咽癌血清中高表達(dá)的EBV相關(guān)miRNA （1）鼻咽癌組織與鼻咽粘膜炎組織miRNA的提取。 （2）實時熒光定量PCR反應(yīng)。 （3）血清miRNA提取。 （4）miRNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（CDNA的合成）。 結(jié)果： 血清miRNA可能與鼻咽癌的發(fā)生密切相關(guān)。 結(jié)論： （1）鼻咽癌患者血清miRNA2倍高于正常人的有54個，5倍高的有22個；2倍低于正常人血清的miRNA有88個，5倍低的有16個。 （2）鼻咽癌患者血清EBV相關(guān)miRNA2倍高于正常人血清EBVmiRNA的有EBV-miR-BART4，EBV-miR-BART18-3p，EBV-miR-BART19-5和EBV-miR-BART21-3p等4個。 （3）血清miRNA可能與鼻咽癌的發(fā)生密切相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.63

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本文編號：1213935