本文關(guān)鍵詞：敏感性分子開(kāi)關(guān)檢測(cè)高度近視ZNF644基因突變

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【摘要】：目的：采用雙硫代磷酸化修飾的特異性檢測(cè)引物耦合Pfu高保真DNA聚合酶構(gòu)成的突變敏感性分子開(kāi)關(guān)，檢測(cè)高度近視患者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y（2238G＞A）突變位點(diǎn)。 方法：根據(jù)ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）兩個(gè)突變點(diǎn)在基因序列中的位置，構(gòu)建野生型與突變型重組質(zhì)粒作為研究模板。分別設(shè)計(jì)與野生型和突變基因位點(diǎn)配對(duì)的引物，采用雙硫化磷酸修飾引物3′末端,耦合Pfu高保真DNA聚合酶構(gòu)成的突變敏感性分子開(kāi)關(guān)，對(duì)突變型及野生型質(zhì)粒模板進(jìn)行引物延伸反應(yīng)，利用凝膠成像系統(tǒng)對(duì)其PCR產(chǎn)物進(jìn)行分析。通過(guò)調(diào)節(jié)PCR反應(yīng)過(guò)程中退火溫度，優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，，建立敏感性分子開(kāi)關(guān)檢測(cè)高度近視ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突變的方法，并將該方法用于篩查12位高度近視志愿者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突變。 結(jié)果：當(dāng)檢測(cè)引物與模板完全匹配時(shí)，引物被延伸，有PCR產(chǎn)物，引物與模板不完全匹配時(shí)，引物不被延伸，則無(wú)PCR產(chǎn)物。在提高PCR反應(yīng)退火溫度條件下敏感性分子開(kāi)關(guān)特異性提高，62℃退火溫度下可特異性檢測(cè)出質(zhì)粒模板ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突變位點(diǎn)。使用該方法對(duì)12例臨床高度近視志愿者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y（2238G＞A）突變的篩查未發(fā)現(xiàn)突變。 結(jié)論：突變敏感性分子開(kāi)關(guān)可用于篩查高度近視患者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突變。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R778.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1189383