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抗人CD133單克隆抗體的研制及生物學(xué)活性研究

發(fā)布時(shí)間:2017-11-10 09:14

  本文關(guān)鍵詞:抗人CD133單克隆抗體的研制及生物學(xué)活性研究


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【摘要】:目的:本研究擬制備鼠抗人CD133單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株并鑒定其單抗生物活性,為后續(xù)制備抗人CD133單鏈抗體及構(gòu)建免疫毒素并靶向殺傷喉癌干細(xì)胞進(jìn)行免疫治療提供前期工作基礎(chǔ)。 方法:利用純化的CD133抗原免疫Balb/c小鼠,采用PEG促融合技術(shù),取骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與上述免疫小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合,選用ELISA法篩選雜交瘤,培養(yǎng)能產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,同時(shí)多次檢測(cè)雜交瘤活性和抗體亞型后,擴(kuò)大培養(yǎng),陽(yáng)性克隆凍存。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抗人CD133單克隆抗體與基因工程CHO(CD133~+)細(xì)胞和Hep-2細(xì)胞株中CD133~+細(xì)胞的結(jié)合情況。 結(jié)果:應(yīng)用PEG介導(dǎo)細(xì)胞融合,共融合96孔培養(yǎng)板8塊,融合率約為51.3%。連續(xù)克隆化培養(yǎng),制得1株穩(wěn)定分泌特異性抗CD133分子的雜交瘤細(xì)胞株(aCD133,克隆號(hào)為15),該株單抗經(jīng)體外連續(xù)傳代培養(yǎng)。經(jīng)快速定性試紙法鑒定該單抗亞型為IgG1,輕鏈為к鏈,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)已制備單抗與CHO細(xì)胞和Hep-2細(xì)胞中CD133抗原的結(jié)合率分別為78.62±8.25%和1.8±0.45%。 結(jié)論:成功制備分泌抗人CD133單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,,該單抗具有CD133+細(xì)胞特異親和性。本實(shí)驗(yàn)為后續(xù)抗人CD133單鏈抗體的制備及構(gòu)建免疫毒素并靶向殺傷喉癌干細(xì)胞的治療奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】:吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號(hào)】:R739.65

【參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳偉;抗人CD133單克隆抗體的制備及CD133抗原在肝癌組織中的表達(dá)[D];蘇州大學(xué);2010年



本文編號(hào):1165990

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