發(fā)布時間：2017-11-10 09:14

  本文關(guān)鍵詞：抗人CD133單克隆抗體的研制及生物學活性研究

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【摘要】：目的：本研究擬制備鼠抗人CD133單克隆抗體雜交瘤細胞株并鑒定其單抗生物活性，為后續(xù)制備抗人CD133單鏈抗體及構(gòu)建免疫毒素并靶向殺傷喉癌干細胞進行免疫治療提供前期工作基礎(chǔ)。 方法:利用純化的CD133抗原免疫Balb/c小鼠，采用PEG促融合技術(shù)，取骨髓瘤細胞SP2/0與上述免疫小鼠脾細胞進行融合，選用ELISA法篩選雜交瘤，培養(yǎng)能產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細胞株，同時多次檢測雜交瘤活性和抗體亞型后，擴大培養(yǎng)，陽性克隆凍存。流式細胞術(shù)檢測抗人CD133單克隆抗體與基因工程CHO（CD133~+）細胞和Hep-2細胞株中CD133~+細胞的結(jié)合情況。 結(jié)果:應(yīng)用PEG介導(dǎo)細胞融合，共融合96孔培養(yǎng)板8塊，融合率約為51.3%。連續(xù)克隆化培養(yǎng)，制得1株穩(wěn)定分泌特異性抗CD133分子的雜交瘤細胞株(aCD133，克隆號為15)，該株單抗經(jīng)體外連續(xù)傳代培養(yǎng)。經(jīng)快速定性試紙法鑒定該單抗亞型為IgG1，輕鏈為к鏈，通過流式細胞術(shù)檢測已制備單抗與CHO細胞和Hep-2細胞中CD133抗原的結(jié)合率分別為78.62±8.25%和1.8±0.45%。 結(jié)論:成功制備分泌抗人CD133單克隆抗體的雜交瘤細胞株，，該單抗具有CD133+細胞特異親和性。本實驗為后續(xù)抗人CD133單鏈抗體的制備及構(gòu)建免疫毒素并靶向殺傷喉癌干細胞的治療奠定基礎(chǔ)。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.65

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本文編號：1165990