本文關(guān)鍵詞：恒河猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)及體外誘導(dǎo)為角膜內(nèi)皮細(xì)胞的研究

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 角膜內(nèi)皮細(xì)胞 Transwell非接觸共培養(yǎng)系統(tǒng) 恒河猴

【摘要】：目的將體外培養(yǎng)的恒河猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)移植于角膜內(nèi)皮細(xì)胞失代償?shù)慕悄?nèi)表面,分時(shí)段觀察細(xì)胞形態(tài)及功能改變,分析體內(nèi)誘導(dǎo)BMSCs致角膜內(nèi)皮細(xì)胞化的可行性。同時(shí)對BMSCs誘導(dǎo)為角膜內(nèi)皮細(xì)胞(Corneal endothelial cells, CECs)的體外環(huán)境條件進(jìn)行初步探索。 方法恒河猴8只,隨機(jī)分為兩組：實(shí)驗(yàn)組(6只)、對照組(2只)；應(yīng)用超聲乳化技術(shù)破壞CECs制作角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能失代償模型。采用密度梯度離心法分離培養(yǎng)幼猴BMSCs,經(jīng)鑒定、Brdu標(biāo)記后應(yīng)用前房注射法移植入損傷后的角膜內(nèi)表面。術(shù)后觀察角膜透明度、眼壓、角膜水腫程度、角膜及虹膜有無新生血管、前房深度、瞳孔大小、房水渾濁程度,主觀上觀察BMSCs移植后對正常角膜組織結(jié)構(gòu)及代謝功能的影響；術(shù)后1月、2月、3月摘取術(shù)眼角膜植片進(jìn)行病理切片(HE染色)、掃描電鏡及透射電鏡檢測,從客觀上觀察替代移植后BMSCs的分布狀況、形態(tài)學(xué)改變、連接狀態(tài)及生長趨勢；行抗Brdu單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色及神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)免疫組織化學(xué)染色,以判斷角膜植片內(nèi)表面的細(xì)胞是否為移植的細(xì)胞,以及移植后的細(xì)胞是否表達(dá)角膜內(nèi)皮細(xì)胞特異性表面分子。揭膜消化法分離培養(yǎng)幼猴角膜內(nèi)皮細(xì)胞,形態(tài)學(xué)觀察及NSE免疫組化染色法進(jìn)行鑒定；采用BMSCs和CECs置于Transwell非接觸共同培養(yǎng)體系以及應(yīng)用含有角膜內(nèi)皮失代償恒河猴前房水的培養(yǎng)基對BMSCs進(jìn)行培養(yǎng)兩種方式對BMSCs進(jìn)行體外誘導(dǎo),觀察BMSCs形態(tài)學(xué)變化并采用NSE免疫組織化學(xué)染色行細(xì)胞鑒定。 結(jié)果超聲乳化損傷角膜內(nèi)皮后成功建立了角膜內(nèi)皮功能失代償模型,角膜透明度逐漸下降。實(shí)驗(yàn)組BMSCs移植入前房后,實(shí)驗(yàn)組角膜透明度于2周后開始逐漸增加。電鏡觀察見：1月時(shí)細(xì)胞成疊加生長,細(xì)胞間連接較少；2月時(shí)細(xì)胞間連接較前增加；3月時(shí)細(xì)胞類似單層生長,細(xì)胞間連接較多,但存在細(xì)胞窗；形態(tài)上細(xì)胞逐漸由長梭形向短梭形及多邊形靠攏。對照組角膜混濁不能恢復(fù),可見新生血管長入；電鏡下觀察見后彈力層裸露,無細(xì)胞覆蓋,偶可見殘存角膜內(nèi)皮細(xì)胞,貼附不牢固。體外誘導(dǎo)的兩種方法：Transwell共培養(yǎng)法及房水-培養(yǎng)基誘導(dǎo)法,分別于第3周及第2周采用NSE法鑒定出陽性結(jié)果,細(xì)胞形態(tài)上改變不甚明顯；重復(fù)誘導(dǎo)一次結(jié)果相同。 結(jié)論體外培養(yǎng)的同種異體BMSCs采用改良的前房注射法植入損傷后的恒河猴角膜內(nèi)表面后可在一定程度上替代角膜內(nèi)皮細(xì)胞,發(fā)揮它的泵功能,且能部分表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞表面相關(guān)蛋白。Transwell非接觸共培養(yǎng)及房水-培養(yǎng)基法均可體外誘導(dǎo)BMSCs分化為角膜內(nèi)皮樣細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R772.2

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 艾國平,粟永萍,閆國和,冉新澤,劉曉宏,羅成基,程天民;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年05期

2 羅飛;間充質(zhì)干細(xì)胞在組織工程中的研究進(jìn)展[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年02期

3 易偉斌;胡竹林;徐巖澤;王廷華;黃桂琴;陳娟;羅哲文;;兔血管內(nèi)皮細(xì)胞對角膜后彈力層代謝的影響[J];國際眼科雜志;2007年04期

4 張紅言;王軍;;不同粘彈劑在復(fù)雜性白內(nèi)障超聲乳化術(shù)中的臨床觀察[J];國際眼科雜志;2008年06期

5 吳子?xùn)|;鐘景賢;麥?zhǔn)?鄭敏;鄭卡;;白內(nèi)障超聲乳化對糖尿病患者角膜內(nèi)皮的影響[J];國際眼科雜志;2008年09期

6 張海良;馬翔;王琪;孫洪臣;;bFGF緩釋微囊顆粒誘導(dǎo)角膜新生血管形成治療兔大泡性角膜病變[J];國際眼科雜志;2009年10期

7 孟志為;楊麗霞;胥亞男;;超聲乳化白內(nèi)障手術(shù)對年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響[J];國際眼科雜志;2010年05期

8 喻磊;李興育;王從毅;;超聲乳化術(shù)中灌注液迷流綜合征表現(xiàn)及治療方法的臨床觀察[J];國際眼科雜志;2011年03期

9 孫興才;細(xì)胞外基質(zhì)對角膜創(chuàng)傷修復(fù)的作用[J];國外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊;1997年02期

10 李永華;張玉潔;聶冬麗;曹廣華;;超聲乳化術(shù)對抗青光眼術(shù)后白內(nèi)障五方位角膜內(nèi)皮的影響[J];國際眼科雜志;2013年04期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉小偉;兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞移植和自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞替代移植治療角膜內(nèi)皮損傷的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張超;組織工程角膜的體外構(gòu)建及移植的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

，

本文編號：1157444