本文關(guān)鍵詞：多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1通過(guò)激活NF-κB途徑導(dǎo)致高糖人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡

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【摘要】：目的探討多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1[poly(adenosine diphosphate-ribose)polymeras-1,PARP-1]和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)在高糖人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞(retinal vascular endothelial cells,RVEC)中的相互作用及其在人RVEC中的表達(dá)定位及作用機(jī)制。方法體外培養(yǎng)人RVEC及HEK293T細(xì)胞,并進(jìn)行傳代,同時(shí)構(gòu)建高糖人RVEC細(xì)胞模型。構(gòu)建PARP-EGFP及Flag-NF-κB質(zhì)粒,酶切鑒定后轉(zhuǎn)染高糖培養(yǎng)的人RVEC,Western blot法檢測(cè)重組質(zhì)粒表達(dá)目的基因的效果,并應(yīng)用Western blot法和免疫共沉淀法檢測(cè)高糖人RVEC中PARP-1和NF-κB的相互作用。PARP-EGFP和Flag-NF-κB質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染人RVEC,激光共聚焦掃描顯微鏡檢測(cè)PARP-1和NF-κB在高糖人RVEC中的定位及其相互作用。結(jié)果人RVEC復(fù)蘇后24 h貼壁,細(xì)胞呈扁平梭形,3 d左右細(xì)胞開(kāi)始融合呈鋪路石樣,單層生長(zhǎng),鋪滿瓶底,并可見(jiàn)接觸抑制現(xiàn)象。成功構(gòu)建PARP-EGFP及Flag-NF-κB質(zhì)粒,并有效表達(dá)目的基因。免疫共沉淀結(jié)果顯示PARP-1和NF-κB是相互作用的蛋白質(zhì),高糖組NF-κB p50的條帶比正常對(duì)照組明顯增粗,并且高糖情況下PARP-1結(jié)合NF-κB的量較正常對(duì)照組明顯增加。激光共聚焦掃描顯微鏡結(jié)果顯示PARP和NF-κB均表達(dá)于正常的人RVEC的細(xì)胞核和核周區(qū)域,當(dāng)受到高濃度葡萄糖影響后,PARP-1和NF-κB均集中表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi),尤以NF-κB最顯著。結(jié)論 PARP-1和NF-κB是相互作用的蛋白質(zhì),血糖增高時(shí),PARP-1可能進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)并結(jié)合同時(shí)進(jìn)入細(xì)胞核的NF-κB,激活NF-κB信號(hào)通路,引起RVEC凋亡,導(dǎo)致DR的發(fā)生。
【作者單位】： 大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科;上海交通大學(xué)附屬上海市第一人民醫(yī)院眼科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(編號(hào):81300737)~~
【分類號(hào)】：R587.2;R774.1
【正文快照】： l l l l 秦秀虹出生,河北保定人,博士,副主任醫(yī)師。聯(lián)系電話:0411-83635963;E-mail:18098876506@163.comAbout LU Jian-Min:Male,born inApril,1980.Medical doctor,associatechief physician.Tel:+86-411-83635963;E-mail:18098876506@163.com修回日期:2014-11-05Accepted da

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1 樸春麗;于淼;姜U，

本文編號(hào)：1155543