本文關(guān)鍵詞：AFDX-116對體外培養(yǎng)人胚胎眼鞏膜成纖維細胞調(diào)控的研究

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【摘要】：近視是一種最常見的世界性眼科疾病，在歐美，大約有三分之一的美國成年人患有不同程度的近視[1]，隨著經(jīng)濟的發(fā)展，在一些亞洲國家人群中，近視的患病率逐漸增高且近年來有逐漸超過歐美西方國家的趨勢[2]。作為結(jié)締組織，鞏膜由鞏膜成纖維細胞以及鞏膜細胞外基質(zhì)中的膠原蛋白組成，鞏膜成纖維細胞及膠原成分在眼球正常生長發(fā)育過程以及近視發(fā)生過程鞏膜重塑中發(fā)揮極其重要的作用。鞏膜成纖維細胞在鞏膜組織結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性方面起到重要作用，鞏膜重塑過程即由鞏膜成纖維細胞參與完成，當(dāng)發(fā)生近視后，患者鞏膜成纖維細胞減少，膠原纖維變細，鞏膜變薄。近年來多項研究表明，在近視發(fā)生發(fā)展過程中，成纖維細胞中膠原蛋白水平的變化對鞏膜重塑起著重要作用[3-5]。由此，對鞏膜成纖維細胞數(shù)量及膠原蛋白含量在近視發(fā)生發(fā)展過程中的變化加以研究，從而進一步發(fā)現(xiàn)新型藥物以抑制近視發(fā)展對于近視的治療意義重大。 在近視患者中，為了有效抑制近視的發(fā)展，經(jīng)過較大量的臨床觀察以及實驗研究證實，選擇性M1受體拮抗劑哌侖西平和非選擇性M受體拮抗劑阿托品在抑制近視發(fā)生發(fā)展方面療效確切并在臨床中得到廣泛的應(yīng)用[6]。M1-M5五種M受體亞型在鼠、人眼鞏膜組織中均有表達[7]，近年來研究證明，除了阿托品和哌侖西平，選擇性M4受體拮抗劑也可作用于鞏膜成纖維細胞和鞏膜膠原蛋白從而延緩近視發(fā)生發(fā)展進程，同時發(fā)現(xiàn)，M2受體在近視過程中也可起到相應(yīng)的作用[14]。此次實驗選取人胚胎眼鞏膜成纖維細胞，對該細胞中M2受體是否表達進行檢測，同時觀察經(jīng)選擇性M2受體拮抗劑AFDX-116作用于細胞后， M2受體的表達量、細胞增殖的數(shù)量以及I型膠原合成量所發(fā)生的變化。探討人胚胎眼鞏膜成纖維細胞細胞M2受體在近視發(fā)生發(fā)展過程中的作用以及其選擇性拮抗劑AFDX-116在近視發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用和作用機制。 目的 檢測人胚胎眼鞏膜成纖維細胞（human fetal scleral fibroblasts, HFSFs）中毒蕈堿乙酰膽堿能M2受體的表達，觀察經(jīng)AFDX-116藥物刺激后，M2受體在細胞的表達量、鞏膜細胞數(shù)量以及I型膠原蛋白合成量的變化，探討AFDX-116在近視過程當(dāng)中所起的作用及作用機制。 方法 取5-7代HFSFs，分為兩組，實驗組：接受AFDX-116刺激，培養(yǎng)液中藥物終濃度分別為0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L，對照組：不接受藥物刺激，僅加入等體積的培養(yǎng)液。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（ReversTranscription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）法檢測對照組及實驗組HFSFsM2受體mRNA相對表達量及表達量變化；CCK8(Cell Counting Kit-8)法檢測對照組及實驗組HFSFs增殖變化情況，于酶標儀450nm檢測吸光值（OD值）；免疫熒光(Immunofluorescence,IF)法對對照組及實驗組HFSFs I型膠原蛋白（COL1A1）在細胞中的表達進行觀察。 結(jié)果 1．M2受體mRNA在HFSFs的表達及變化 對照組HFSFs可檢測到M2受體mRNA的表達，其相對表達量為0.372±0.022，實驗組HFSFs在AFDX-1161μmol/L(0.418±0.007)、10μmol/L(0.579±0.035)、100μmol/L(0.768±0.042)濃度下，其M2受體mRNA相對表達量有所增高，，與對照組相比，差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.029、0.001、0.000）；在AFDX-1160.1μmol/L（0.391±0.018）濃度下M2受體mRNA相對表達量未觀察到明顯變化，與對照組相比，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.327）。 2．HFSFs增殖變化 對照組HFSFs OD值為0.820±0.048，實驗組HFSFs在AFDX-1161μmol/L（0.725±0.078）、10μmol/L（0.690±0.053）、100μmol/L（0.612±0.042）濃度下OD值均有不同程度的降低，差異較對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.049、0.004、0.000）；在AFDX-1160.1μmol/L（0.802±0.078）濃度下OD值僅輕度下降，較對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.745）。 3．COL1A1表達變化 IF結(jié)果顯示AFDX-116可促進HFSFs COL1A1分泌，對照組HFSFs可檢測到COL1A1表達，實驗組HFSFs在AFDX-1160.1μmol/L濃度下未觀察到明顯的COL1A1分泌增多，在AFDX-1161μmol/L、10μmol/L、100μmol/L濃度下COL1A1表達較對照組可觀察到不同程度的增加。 結(jié)論 1．M2受體在體外培養(yǎng)的人胚胎眼鞏膜成纖維細胞中可檢測到穩(wěn)定表達。 2．選擇性M2受體拮抗劑AFDX-116在促進人胚胎眼鞏膜成纖維細胞M2受體表達、抑制細胞增殖、促進I型膠原蛋白表達方面可發(fā)揮顯著作用。 3．M2受體可能參與了近視的發(fā)生發(fā)展過程。
【關(guān)鍵詞】：AFDX-116M2受體 人胚胎眼鞏膜成纖維細胞 細胞增殖I型膠原蛋白
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R778.11
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 英文縮寫一覽表12-13
• 引言13-15
• 材料和方法15-21
• 結(jié)果21-23
• 討論23-28
• 結(jié)論28-29
• 附圖29-32
• 參考文獻32-35
• 綜述部分 視網(wǎng)膜乙酰膽堿能遞質(zhì)系統(tǒng)與近視的關(guān)系及研究進展35-53
• 參考文獻47-53
• 個人簡歷及在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文53-54
• 致謝54

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 于建云,李樹華,韓曉華,許冰瑩,林海英,趙旭東;腦震蕩鼠細胞組織病理學(xué)研究[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年02期

2 王麗娜;張豐菊;;病理性近視鞏膜細胞外基質(zhì)中膠原蛋白的研究進展[J];臨床眼科雜志;2007年01期

3 張麟,劉慧榮,趙榮瑞,張健,惠汝太,劉力生;擴張型心肌病抗心肌β_1與M_2受體自身抗體的初步研究[J];中華心血管病雜志;1998年01期

4 劉瓊;于健;曾駿文;;形覺剝奪性近視眼鞏膜組織中M受體5種亞型表達的變化[J];眼科新進展;2009年12期

本文編號：1114553