本文關(guān)鍵詞：利用多重單堿基引物延伸法檢測耳聾基因熱點(diǎn)突變

  更多相關(guān)文章： 非綜合征型耳聾 多重單堿基引物延伸法 熱點(diǎn)突變

【摘要】：背景：聽覺系統(tǒng)中外耳、中耳、內(nèi)耳結(jié)構(gòu)異常及聽覺傳導(dǎo)信號(hào)通路中的聽神經(jīng)和各級(jí)中樞發(fā)生病變,導(dǎo)致聽功能障礙,表現(xiàn)出不同程度的聽力下降,統(tǒng)稱為耳聾。我國聽力殘疾人數(shù)眾多,每年有3萬左右聾兒出生,發(fā)病率為1/500～1/1000。60%的耳聾患者是遺傳因素所導(dǎo)致的,遺傳性聾中非綜合征型耳聾占70%,30%為綜合征型耳聾。迄今已經(jīng)定位的非綜合征型耳聾基因座約有136個(gè),已克隆基因88個(gè)。雖然耳聾具有較高的遺傳異質(zhì)性,但大部分非綜合征型耳聾由少數(shù)幾個(gè)基因熱點(diǎn)突變引起,包括GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體基因(mtDNA12SrRNA)等,這使遺傳性耳聾的基因診斷和篩查成為可能。傳統(tǒng)的耳聾基因檢測方法包括限制性片段長度多態(tài)性分析、限制性內(nèi)切酶酶切指紋-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析、變性高效液相色譜法、實(shí)時(shí)熒光定量Taqman MGB探針法、PCR結(jié)合Sanger測序、高分辨率熔解曲線法等。但是這些方法很難同時(shí)對(duì)不同基因上的多個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測�；蛐酒夹g(shù)雖然能同時(shí)對(duì)多基因、多位點(diǎn)進(jìn)行檢測,但是成本昂貴,對(duì)技術(shù)要求高。因此,建立一種能一次性檢測多個(gè)熱點(diǎn)突變、可靠、經(jīng)濟(jì)、快速的技術(shù)尤為重要。 目的：采用多重單堿基引物延伸法對(duì)耳聾先證者進(jìn)行GJB2、 GJB3、SLC26A4、12SrRNA基因12個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的一次性檢測,以期建立一種快速、可靠、經(jīng)濟(jì)的耳聾基因診斷方法。 方法：采用多重單堿基引物延伸法對(duì)96名非綜合征型耳聾先證者、66名家系成員及50名正常人,共212名,進(jìn)行GJB2、GJB3、 SLC26A4、12SrRNA基因12個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的一次性檢測,并采用Sanger測序進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)果：1、采用多重單堿基引物延伸法對(duì)96名非綜合征型耳聾先證者、66名家系成員及50名正常人,共212名,進(jìn)行GJB2、GJB3、 SLC26A4、12SrRNA基因12個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的一次性檢測,結(jié)果與Sanger測序結(jié)果一致,準(zhǔn)確性為100%。2、采用多重單堿基引物延伸法對(duì)96名非綜合征型耳聾先證者進(jìn)行GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA基因12個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的一次性檢測,大大提高了檢出率,檢出率為41.67%,而前期單個(gè)基因／單個(gè)位點(diǎn)的一次性檢出率只有31.25%。3、50名正常人中有1名攜帶GJB2c.235delC,正常人中攜帶率為2%,與國內(nèi)研究顯示的正常人群攜帶率在1%～6%之間相符。 結(jié)論：建立了一種可以一次性檢測非綜合征型耳聾GJB2、GJB3、 SLC26A4、12SrRNA基因12個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的快速、可靠、經(jīng)濟(jì)的基因診斷方法。
【關(guān)鍵詞】：非綜合征型耳聾 多重單堿基引物延伸法 熱點(diǎn)突變
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R764.43
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 目錄9-10
• 主要實(shí)驗(yàn)儀器、試劑與耗材10-13
• 英文~.略詞簡表13-14
• 前言14-18
• 1 研究對(duì)象18-19
• 2 研究方法19-27
• 2.1 外周血基因組DNA(gDNA)提取19
• 2.2 96個(gè)先證者前期基因檢測19
• 2.3 多重單堿基引物延伸19-25
• 2.4 Sanger測序驗(yàn)證25-26
• 2.5 正常對(duì)照人群篩查26-27
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-44
• 3.1 96個(gè)先證者前期基因檢測結(jié)果27-31
• 3.2 多重單堿基引物延伸結(jié)果31-44
• 4 討論44-51
• 4.1 多重單堿基引物延伸法在基因分型中的應(yīng)用44-45
• 4.2 非綜合征型遺傳性耳聾突變位點(diǎn)的選擇45-46
• 4.3 多重單堿基引物延伸結(jié)果討論46-49
• 4.4 耳聾檢測技術(shù)的展望49-51
• 5 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 綜述57-79
• 參考文獻(xiàn)73-79
• 在讀期間主要研究成果79-80
• 致謝80

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;一種篩查中國人遺傳性耳聾和氨基糖苷耳毒性易感人群的分子遺傳學(xué)方法(英文)[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年01期

2 韓明鯤;韓東一;蘭蘭;王大勇;趙翠;劉曉雯;王秋菊;;散發(fā)感音神經(jīng)性聾患者中GJB2基因突變檢測的臨床意義[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2008年04期

3 王瑋;段程穎;汪憲平;丁潔;王挺;顧斌;李紅;;耳聾基因GJB2的突變分析及其與臨床相關(guān)性的研究[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年01期

4 馬寧;張正國;;遺傳性耳聾檢測及風(fēng)險(xiǎn)分析[J];國際生物醫(yī)學(xué)工程雜志;2006年06期

5 段程穎;李紅;;遺傳性耳聾基因Cx26的研究現(xiàn)狀及臨床應(yīng)用[J];國際遺傳學(xué)雜志;2006年06期

6 王樹輝;胡正茂;肖自安;唐青來;夏昆;楊新明;;GJB2基因在湖南地區(qū)非綜合征耳聾患者中的突變分析[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年06期

7 關(guān)靜;郭玉芬;徐百成;趙亞麗;李慶忠;王秋菊;;中國西北地區(qū)部分語前聾患者GJB2基因突變的分子流行病學(xué)研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2006年04期

8 Denise Yan;;The Genetic Deafness in Chinese Population[J];Journal of Otology;2006年01期

9 ;Screening of GJB2 mutations in Chinese population[J];Journal of Otology;2007年01期

10 ;Prevalence of the GJB2 Mutations in Deafness Patients of Different Ethnic Origins in Xinjiang[J];Journal of Otology;2007年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Screening the putative nuclear modifying factors in a Chinese extensive deafness family associated with A1555G mutation[A];第六次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議文摘匯編[C];2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳俞;新疆維吾爾族和漢族非綜合征性聾耳聾基因常見突變的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

2 李慶忠;遺傳性耳聾致病基因定位克隆與縫隙連接蛋白分子流行病學(xué)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

3 于飛;非綜合征型耳聾患者GJB2基因突變篩查和全頻譜突變圖譜繪制[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

4 張海軍;線粒體A1555G突變相關(guān)非綜合征耳聾大家系的分子病因?qū)W研究[D];東南大學(xué);2006年

5 袁永一;中國人重度—極重度耳聾分子流行病學(xué)及致病機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2007年

6 陳東野;人工耳蝸植入群體中耳聾相關(guān)基因的檢測與分析[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

7 劉勇智;語前聾兒童人工耳蝸植入后語音特征的分析及其同遺傳相關(guān)性的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

8 朱玉華;遲發(fā)性非綜合征型耳聾及老年性、藥物性耳聾的分子機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2009年

9 王云峰;Connexin26蛋白表達(dá)下降致耳蝸病理學(xué)變化和治療探索[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

10 林倩;新生兒及嬰兒的聽覺特性與山東地區(qū)耳聾熱點(diǎn)基因突變及其聽力學(xué)表現(xiàn)的研究[D];山東大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李文雅;失聽新生兒或嬰兒的診斷策略[D];浙江大學(xué);2003年

2 段程穎;耳聾基因GJB2的突變分析及其與臨床相關(guān)性的研究[D];蘇州大學(xué);2006年

3 孟瑋;云南省彝族遺傳性非綜合征性耳聾人群GJB2基因突變的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

4 劉楊;河南地區(qū)非綜合癥型耳聾患者GJB2基因突變分析[D];鄭州大學(xué);2007年

5 吳偉鋒;基于DHPLC的遺傳性耳聾基因突變檢測平臺(tái)的建立和應(yīng)用[D];中南大學(xué);2006年

6 程洪波;遺傳性非綜合征型耳聾兩種致病基因易感位點(diǎn)的關(guān)聯(lián)分析[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

7 鮑曉林;西北地區(qū)遺傳性耳聾家系的分子流行病學(xué)研究[D];蘭州大學(xué);2008年

8 劉曉雯;甘肅省聾啞學(xué)生臨床流行病學(xué)和分子流行病學(xué)研究[D];蘭州大學(xué);2008年

9 杜瑞莉;新疆維漢兩民族NSHI患者GJB2、GJB3及12S rRNA基因突變研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2009年

10 邱海濤;遼寧省新生兒聽力與聾病基因同步篩查的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：1113493