發(fā)布時(shí)間：2017-10-28 19:01

  本文關(guān)鍵詞：聯(lián)合阻斷STAT3和HIF-1α對(duì)低氧條件下喉癌Hep-2細(xì)胞放療及化療的增敏作用

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【摘要】：目的：信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3（signal transducer and activator of transcription3, STAT3）信號(hào)通路在人類多種腫瘤中持續(xù)激活，影響腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。低氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）是機(jī)體在低氧條件下產(chǎn)生的一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，它能調(diào)節(jié)多種低氧反應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。本實(shí)驗(yàn)通過單獨(dú)和聯(lián)合抑制喉癌Hep-2細(xì)胞中HIF-1α和STAT3的表達(dá)探討低氧微環(huán)境下HIF-1α和STAT3對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞放療及化療抵抗作用的影響。 方法： 首先分別在37℃、5%CO2、20%O2和95%濕度條件下的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HIF-1αshRNA的Hep-2（Hep-2HIF-1α-/-）細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，分別用于以下實(shí)驗(yàn)： 1分別于常氧及低氧條件下培養(yǎng)Hep-2細(xì)胞及Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞，Western Blot檢測(cè)HIF-1α的表達(dá)情況。 2低氧條件培養(yǎng)喉癌Hep-2細(xì)胞及Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞，予不同濃度的AG490（0μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、100μg/ml）作用24h用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。 3以50μg/ml的AG490作用于喉癌Hep-2細(xì)胞及Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞，Western Blot檢測(cè)細(xì)胞中HIF-1α、P-STAT3的表達(dá)情況。 4以50μg/ml的AG490分別與不同放射劑量（0Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy）的放射線照射及不同濃度順鉑（0μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml）聯(lián)用，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。 結(jié)果： 1AG490在體外低氧條件下能夠有效的抑制Hep-2細(xì)胞及Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞的生長(zhǎng)，且具有濃度依賴性，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)資料的方差分析顯示：各濃度處理組細(xì)胞存活率的總體均數(shù)間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（F=572.884, P0.01）；Hep-2細(xì)胞及Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞組間的細(xì)胞存活率的差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（F=160.114，P0.01）。且相同濃度下對(duì)Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞存活率的影響強(qiáng)于Hep-2細(xì)胞。 2Western blot結(jié)果顯示AG490在濃度為50μg/ml時(shí)明顯抑制P-STAT3的表達(dá)，無論是在Hep-2細(xì)胞（t=6.0927,P0.01），還是在Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞(t=8.6536,P0.01)，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在沒有AG490的作用下，沉默HIF-1α對(duì)P-STAT3的表達(dá)的影響不大，(t=2.1421,P0.05)，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而AG490抑制P-STAT3后HIF-1α的表達(dá)受到影響，(t=3.5626,P0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3AG490聯(lián)合放療與化療與單獨(dú)應(yīng)用放、化療干預(yù)Hep-2細(xì)胞及Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞相同時(shí)間，MTT結(jié)果顯示：（1）單獨(dú)放射線照射可以抑制Hep-2細(xì)胞及Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞的增殖。Hep-2細(xì)胞及Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞組間的細(xì)胞抑制率的差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。聯(lián)合50μg/mlAG490時(shí)各放射劑量對(duì)喉癌細(xì)胞的抑制作用增強(qiáng)，明顯高于單獨(dú)應(yīng)用相同劑量的放射線照射。（2）順鉑在體外低氧條件下能夠有效的抑制Hep-2細(xì)胞及Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞的生長(zhǎng)，且具有濃度依賴性，（F=10.646, P0.05）；Hep-2細(xì)胞及Hep-2HIF-1α-/-細(xì)胞組間的細(xì)胞抑制率的差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（F=402.043，，P0.001）。50μg/ml的AG490聯(lián)合順鉑用藥組，當(dāng)0.5μg/ml順鉑作用于Hep-2細(xì)胞時(shí)q值小于1.15，其余各組q值均大于1.15，說明50μg/ml的AG490與0.5μg/ml的順鉑對(duì)喉癌細(xì)胞的抑制為相加作用，而與1.0μg/ml順鉑、2.0μg/ml順鉑、5.0μg/ml順鉑起協(xié)同作用，OD圖可見曲線右移，也提示協(xié)同作用的存在。 結(jié)論： 1單獨(dú)抑制STAT3、HIF-1α均可抑制細(xì)胞的增殖。 2聯(lián)合抑制STAT3和HIF-1α可增加喉癌細(xì)胞的放射治療和化療的敏感性。
【關(guān)鍵詞】：STAT3 HIF-1α 喉癌 順鉑 放療
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.65
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-10
• 材料與方法10-18
• 結(jié)果18-21
• 附圖21-25
• 附表25-27
• 討論27-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 綜述 HIF-1α與惡性腫瘤的關(guān)系33-41
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 致謝41-42
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷42

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 李震;屈永濤;李曉明;路秀英;張佳寧;;缺氧誘導(dǎo)因子1α反義寡核苷酸對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌的放療增效作用[J];中國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科;2010年11期

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本文編號(hào)：1109501