本文關(guān)鍵詞：蕓香苷對(duì)人晶體上皮細(xì)胞氧化損傷和凋亡保護(hù)作用及相關(guān)基因表達(dá)的研究

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【摘要】：目的 國(guó)內(nèi)外研究一直認(rèn)為，氧化損傷是各種原因誘發(fā)年齡相關(guān)性白內(nèi)障的共同作用機(jī)制，晶狀體上皮細(xì)胞（LEC）凋亡是所有非先天性白內(nèi)障發(fā)生得共同通路。年齡相關(guān)性白內(nèi)障LEC中Bcl-2基因表達(dá)為陰性，而Bax, Caspase-3表達(dá)為陽性。本課題以此為理論依據(jù)，研究黃酮類化合物蕓香苷(Ru)對(duì)過氧化氫（H_2O_2）誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞（HLEC）氧化損傷和凋亡的保護(hù)作用及Ru對(duì)相關(guān)凋亡基因Bcl-2,Bax, Caspase-3轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響。 方法 （1）正常培養(yǎng)的SRA01-04系HLEC，分別加入不同濃度的Ru和H_2O_2，共同培養(yǎng)24h，，MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞生存活力，以確定有效的Ru和H_2O_2實(shí)驗(yàn)濃度。 （2）用濃度為0,25,50,100μmol/L的Ru預(yù)處理HLEC1h，再分別加入200μmol/LH_2O_2共同培養(yǎng)24h，MTT法檢測(cè)Ru對(duì)各預(yù)處理組細(xì)胞增殖活性的影響。 （3）收集各組細(xì)胞裂解液，比色法檢測(cè)超氧化物歧化酶（SOD）活性，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測(cè)還原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量。 （4）制作細(xì)胞爬片，TUNEL法染色各組凋亡細(xì)胞，觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)并計(jì)算凋亡指數(shù)（AI）。 （5）收集各組細(xì)胞提取總RNA，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞Bcl-2, Bax, Caspase-3mRNA水平表達(dá)。 結(jié)果 （1）實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，H_2O_2濃度在200μmol/L時(shí)接近細(xì)胞生存半數(shù)抑制率（IC50），因此選擇200μmol/L H_2O_2作為H_2O_2組實(shí)驗(yàn)濃度。 （2）濃度小于100μmol/L的Ru對(duì)細(xì)胞增殖能力無顯著性影響；選擇25,50,100μmol/L的Ru分別作為Ru低劑量組、Ru中劑量組和Ru高劑量組濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 （3） H_2O_2組HLEC增殖能力，SOD,GSH含量較對(duì)照組顯著下降、MDA和AI較對(duì)照組明顯增高（P＜0.01）；Bcl-2基因表達(dá)明顯下調(diào)，Bax, Caspase-3基因表達(dá)明顯上調(diào)（P＜0.05）。 （4）Ru（25,50,100μmol/L）預(yù)處理組與H_2O_2組相比，細(xì)胞生存率，抗氧化水平明顯提高，凋亡細(xì)胞數(shù)量顯著減少(P＜0.01）；Bcl-2基因表達(dá)量較H_2O_2組有所增加，Bax, Caspase-3基因表達(dá)明顯減少（P＜0.05）。 結(jié)論 Ru可以提高HLEC增殖能力，保護(hù)H_2O_2誘導(dǎo)HLEC的氧化損傷和凋亡，其機(jī)制可能與Ru能夠上調(diào)Bcl-2基因表達(dá)，下調(diào)Bax基因、Caspase-3轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：晶體上皮細(xì)胞 蕓香苷 過氧化氫 氧化損傷 凋亡基因
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R776.1
【目錄】：

• 英文縮略語6-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 前言12-15
• 2 材料與方法15-26
• 2.1 材料15-18
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞15
• 2.1.2 主要藥品及試劑15-16
• 2.1.3 儀器設(shè)備16
• 2.1.4 主要溶液配制16-18
• 2.2 方法18-25
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)18
• 2.2.2 細(xì)胞處理與分組18-19
• 2.2.3 MTT 檢測(cè)細(xì)胞活力19
• 2.2.4 檢測(cè) SOD, GSH, MDA 含量19-21
• 2.2.5 TUNEL 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡21-23
• 2.2.6 RT-qPCR 技術(shù)檢測(cè) Bcl-2, Bax 及 Caspase-3 mRNA 水平表達(dá)23-25
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-37
• 3.1 H_2O_2最佳實(shí)驗(yàn)濃度選擇26-27
• 3.2 Ru 對(duì) HLEC 細(xì)胞活力的影響27-28
• 3.3 Ru 對(duì) H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性保護(hù)作用28-29
• 3.4 Ru 對(duì) HLEC 中 SOD, GSH 和 MDA 含量的影響29-31
• 3.5 Ru 對(duì) H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡抑制作用31-32
• 3.6 Ru 對(duì) HLEC Bcl-2, Bax 及 Caspase-3 mRNA 水平表達(dá)的影響32-37
• 3.6.1 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 擴(kuò)增結(jié)果32-34
• 3.6.2 各組 HLEC 中 Bcl-2 基因 mRNA 相對(duì)表達(dá)量34-35
• 3.6.3 各組 HLEC 中 Bax 基因 mRNA 相對(duì)表達(dá)量35-36
• 3.6.4 各組 HLEC 中 Caspase-3 mRNA 相對(duì)表達(dá)量36-37
• 4 討論37-42
• 5 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 附錄47-48
• 致謝48-49
• 綜述49-59
• 參考文獻(xiàn)56-59

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1088543