本文關(guān)鍵詞：A546D突變型TGFBI基因真核表達載體的構(gòu)建及體外表達

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【摘要】：目的構(gòu)建A546D突變型TGFBI基因真核表達載體和體外轉(zhuǎn)染體系,為研究野生型及A546D突變型TGFBI基因的功能提供實驗基礎(chǔ)。方法應(yīng)用重疊延伸PCR法定點誘變,構(gòu)建A546D突變型TGFBI基因真核表達載體,以陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)體外轉(zhuǎn)染技術(shù)瞬時轉(zhuǎn)染人角膜上皮(human corneal epithelium,HCE)細(xì)胞,Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)基中HCE細(xì)胞分泌的TGFBI蛋白的表達。結(jié)果重組質(zhì)粒總長約7.5 kb,由HindⅢ、XbaⅠ雙酶切鑒定產(chǎn)生5.4 kb和2.1 kb兩條片段者為克隆正確質(zhì)粒。測序鑒定證實了TGFBI基因編碼區(qū)完整插入到載體pcDNA3.1的多克隆位點中,突變載體的第1685位堿基由C替換為A,使其編碼的第546個氨基酸由Ala突變?yōu)锳sp即A546D突變。野生型及A546D突變型載體轉(zhuǎn)染入HCE細(xì)胞后,TGFBI蛋白有效表達。結(jié)論成功構(gòu)建了A546D突變型TGFBI基因真核表達載體,為TGFBI基因相關(guān)性角膜營養(yǎng)不良致病機制的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科;黑龍江省中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外科;哈爾濱醫(yī)科大學(xué)遺傳學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： TGFBI 重疊延伸PCR 人角膜上皮細(xì)胞 轉(zhuǎn)染
【基金】：黑龍江省博士后科研啟動基金(編號:LBH-Q13126) 黑龍江省衛(wèi)生廳科研基金(編號:2012-554) 哈醫(yī)大一院科研基金(編號:2011BS017)~~
【分類號】：R772.2
【正文快照】： 1997年Munier等[1]首次確定了TGFBI為導(dǎo)致角膜營養(yǎng)不良的致病基因,目前已經(jīng)確定由TGFBI基因突變所導(dǎo)致的角膜營養(yǎng)不良類型有顆粒狀角膜營養(yǎng)不良,Avellino角膜營養(yǎng)不良,Reis-Bücklers和Thiel-Behnke角膜營養(yǎng)不良,格子狀角膜營養(yǎng)不良LCDⅠ、Ⅱ、Ⅲ、ⅢA型及Ⅵ型[2]�；蛲蛔兎�

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Su-Juan Zhao;Ya-Nan Zhu;Xing-Chao Shentu;Qi Miao;;Chinese family with atypical granular corneal dystrophy type I caused by the typical R555W mutation in TGFBI[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2013年04期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄭潔;一顆粒狀角膜營養(yǎng)不良家系BIGH3基因的突變檢測[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

2 程玄;Reis-Bucklers角膜營養(yǎng)不良遺傳家系TGFBI基因突變研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳宏,張紹昆,王桂云,張曉光1;人堿性成纖維細(xì)胞生長因子基因真核表達載體的構(gòu)建[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2002年04期

2 高全文,董紹忠,陳希哲,陳琰,楊連甲;人血管內(nèi)皮生長因子165基因真核表達載體的構(gòu)建及表達[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2003年01期

3 廖榮霞,孫建國,陳正堂,周建新;小鼠肝臟特異的微RNA真核表達載體的構(gòu)建及鑒定[J];重慶醫(yī)學(xué);2004年07期

4 代芳,王佑民,王長江,佘其美,周劍,時照明,胡紅琳;人過氧化物酶體增殖體激活受體γ2基因克隆及真核表達載體的構(gòu)建與鑒定[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2004年06期

5 汲振余;李肖蕖;禹麗娜;趙立群;張聚真;裘一兵;張亞冰;裘宋良;楊觀瑞;;野生型抑癌基因PTEN真核表達載體的構(gòu)建及鑒定[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年06期

6 寧寒冰;張玲;李建生;李繼昌;;端粒重復(fù)序列結(jié)合因子2真核表達載體的構(gòu)建及表達[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2006年03期

7 吳波;陳秉;熊群英;容振勤;張偉林;李永浩;;人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子165基因真核表達載體構(gòu)建[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2006年01期

8 唐昊U，

本文編號：1073393