本文關鍵詞：NF-κB、ELAM-1在小梁網(wǎng)細胞氧化損傷中的表達及干預研究

  更多相關文章： 小梁網(wǎng)細胞 氧化應激 NF-κB ELAM-1 α-硫辛酸

【摘要】：目的：本實驗利用α-硫辛酸(α-LA)干預氧化應激下的大鼠小梁網(wǎng)細胞,觀察小梁網(wǎng)細胞的形態(tài)變化,檢測核轉錄因子-κB (NF-κB)、內皮細胞白細胞黏附分子-1(ELAM-1)的表達,探討氧化應激、NF-κB、ELAM-1在原發(fā)性開角型青光眼(POAG)發(fā)病機制中的作用,以及α-LA對小梁網(wǎng)細胞的保護機制。 方法：原代培養(yǎng)大鼠小梁網(wǎng)細胞,免疫組化法鑒定。取傳至第三代的細胞按2×10S/ml消化傳入6孔板,血清饑餓過夜。隨機分為五組：A組為正常對照組,加入不含藥物的無血清培養(yǎng)基；B組為單純H2O2損傷組,加入等量含800μM H2O2的無血清培養(yǎng)基；C組為α-LA干預組,按照給予α-LA濃度的不同分為C1、C2、C3三個亞組,加入等量含800μM H2O2以及濃度依次為100μM、500μM、1000μM的α-LA的無血清培養(yǎng)基。將各組細胞均置于5%CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)2h。光學顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化,免疫組化法和Real-time PCR法檢測并比較各組NF-κB、ELAM-1表達的變化。 結果： 1.利用消化法成功培養(yǎng)出大鼠小梁網(wǎng)細胞,原代細胞呈三角形、梭形或不規(guī)則形,10～14天融合成旋渦狀單層細胞,傳至第三代后細胞形態(tài)穩(wěn)定,梭形,胞漿豐富,顆粒多,可見較多突起及分支。取傳至第三代的細胞行Anti-LN、Anti-FN、Anti-NSE免疫組化染色鑒定,見細胞質呈棕黃色陽性顆粒,陰性對照不著色,符合小梁網(wǎng)細胞的特性。 2.與A組相比,B組小梁網(wǎng)細胞突起減少,細胞回縮,間隙擴大,細胞數(shù)量減少；而C組隨著α-LA濃度的增加,細胞形態(tài)改變與A組相比逐漸趨于不明顯。 3.五組小梁網(wǎng)細胞NF-κB表達有顯著統(tǒng)計學差異(F=426.515,P=0.000)。A組小梁網(wǎng)細胞質中少量表達NF-κB;B組NF-κB大量活化進入細胞核,表達量較A組明顯升高(p=0.000)；C組中NF-κB在胞質、胞核中均有表達,且與B組相比,NF-κB mRNA表達量降低(p分別為0.036、0.000、0.000)；C2、C3兩組與C1組相比明顯降低(p=0.000)；C2、C3兩組間比較無明顯差異(p=0.204)；C2組與A組相比仍偏高(p=0.016),但C3組與A組相比無明顯統(tǒng)計學差異(p=0.155)。 4.五組小梁網(wǎng)細胞ELAM-1均表達在細胞質,且表達量有顯著統(tǒng)計學差異(F=96.409,P=0.000)。A組少量表達ELAM-1mRNA; B組較A組表達明顯升高(p=0.000)；C組較B組表達均明顯降低(p分別為0.016、0.000、0.000)；隨著a-LA濃度的增加,C1、C2、C3三組ELAM-1mRNA的表達量逐漸下降,兩兩比較均有顯著統(tǒng)計學差異(p均為0.000)；C3組與正常組相比仍然偏高(p=0.004)； 結論： 1.氧化應激產(chǎn)生的氧自由基可通過活化NF-κB,進一步激活ELAM-1的轉錄,導致小梁網(wǎng)細胞形態(tài)改變、細胞丟失； 2. ELAM-1可能通過包括NF-κB在內的多種途徑激活,影響小梁網(wǎng)細胞的形態(tài)和功能； 3.α-LA可通過抑制NF-κB的活化,進一步減少ELAM-1的表達,減輕氧化應激對小梁網(wǎng)細胞的損害； 4.α-LA對NF-κB以及ELAM-1表達的抑制與α-LA呈濃度依賴性,1000μM的α-LA可阻斷由800μM H2O2誘導的小梁網(wǎng)細胞中NF-κB的激活,但不能完全阻斷ELAM-1表達的上調。
【關鍵詞】：小梁網(wǎng)細胞 氧化應激 NF-κB ELAM-1 α-硫辛酸
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R775.2
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一部分 小梁網(wǎng)細胞的培養(yǎng)及鑒定9-17
• 材料和方法9-11
• 結果11-13
• 討論13-14
• 參考文獻14-17
• 第二部分 NF-κB、ELAM-1在小梁網(wǎng)細胞氧化損傷中的表達及α-LA對小梁網(wǎng)細胞的保護作用17-34
• 材料和方法17-21
• 結果21-27
• 討論27-31
• 參考文獻31-34
• 全文結論34-35
• 綜述35-44
• 參考文獻40-44
• 攻讀學位期間的研究成果44-45
• 致謝45-46

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳瑜瑜,陳書揚,朱益華,李貴州,蔡俊鋒;人眼小梁網(wǎng)細胞的體外培養(yǎng)[J];福建醫(yī)科大學學報;2005年01期

2 廖海蘭,LIAO Tian-jiang,黃迪南;原發(fā)性急性閉角型青光眼患者房水NO、SOD和MDA水平的檢測及其臨床意義[J];廣東醫(yī)學院學報;2004年04期

3 張福利,周后元;生物抗氧劑α-硫辛酸和二氫硫辛酸的藥理與臨床應用[J];國外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊);1999年01期

4 黃濤,黃開勛;α-硫辛酸的生物醫(yī)學功能[J];生命的化學;2004年01期

5 鐘麗春,李梅,李美玉;人眼小梁細胞體外培養(yǎng)與細胞鑒定[J];眼科學報;1998年04期

6 王睿;王萬輝;;氧化應激在青光眼發(fā)病機制中的作用及相關藥物治療新進展[J];醫(yī)學綜述;2010年23期

7 楊云靜;王東;;氧化應激與β細胞損傷研究進展[J];醫(yī)學綜述;2011年10期

8 趙家良,賈麗君,睢瑞芳,LeonBEllwein,張承訓,降麗娟,張紅,孫國強,宋學峰,毛進;北京市順義縣50歲及以上人群中盲患病率調查[J];中華眼科雜志;1999年05期

9 葛堅;青光眼的研究進展與發(fā)展趨勢[J];中華眼科雜志;2000年03期

10 葛堅,林明楷,卓業(yè)鴻,鄭健梁;糖皮質激素性青光眼患者小梁細胞體外培養(yǎng)和超微結構研究[J];中華眼科雜志;2000年03期

，

本文編號：1028974