本文關(guān)鍵詞：CEACAM16基因新突變導(dǎo)致遺傳性耳聾的分子機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景：DFNA4是常染色體顯性遺傳性非綜合征型耳聾的一個(gè)基因座位,最初是由于發(fā)現(xiàn)了定位于染色體19q13.33上的MYH14基因突變而被命名。2011年,Zheng J等人首次在美國(guó)1070家系中發(fā)現(xiàn)了DFNA4座位上的一個(gè)新的致聾基因CEACAM16,并通過(guò)生物信息學(xué)分析和體外實(shí)驗(yàn)初步鑒定了CEACAM16基因編碼蛋白的相關(guān)功能。2013年,本研究團(tuán)隊(duì)收集了一個(gè)來(lái)自中國(guó)湖南省五代遺傳的常染色體顯性遺傳家系(SY-026),通過(guò)采取傳統(tǒng)的全基因掃描連鎖分析法與最新的外顯子組測(cè)序技術(shù)相結(jié)合的策略,發(fā)現(xiàn)了位于CEACAM16基因上的一個(gè)新突變位點(diǎn),即位于4號(hào)外顯子上的c.505GA (p.G169R),該突變?cè)诩蚁抵泄卜蛛x,提示其為一個(gè)新的CEACAM16基因致聾突變位點(diǎn)。這是世界第二例、國(guó)內(nèi)首例CEACAM16基因致聾突變,意義重大。 在本研究中,我們對(duì)本研究團(tuán)隊(duì)前期發(fā)現(xiàn)的CEACAM16基因新突變開(kāi)展了一系列體外實(shí)驗(yàn),以了解此突變位點(diǎn)對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)、功能及定位的影響。 目的：觀察CEACAM16基因野生型及其突變型G169R在體外細(xì)胞中的表達(dá)與定位,以探討該突變可能的致聾機(jī)制。 方法：以獲贈(zèng)質(zhì)粒為模板,構(gòu)建帶C-端Flag的目的真核表達(dá)質(zhì)粒pRK5-CEACAM16-Flag (野生型)及pRK5-G169R-Flag(突變型)。將上述構(gòu)建成功的兩種質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,48小時(shí)后分別提取細(xì)胞蛋白及上清蛋白,行Western blot檢測(cè)野生及突變蛋白的胞內(nèi)表達(dá)量及其各自的胞外分泌情況。細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)野生蛋白和突變蛋白的亞細(xì)胞分布情況。 結(jié)果：1.成功構(gòu)建了野生型pRK5-CEACAM16-Flag質(zhì)粒及突變型pRK5-G169R-Flag質(zhì)粒,并經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定。 2.用Western blot檢測(cè)CEACAM16野生型及G169R突變型與Flag融合蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)表達(dá)后的兩種蛋白分子量大小與預(yù)期相符,存在多聚體形式,且在胞內(nèi)和胞外均可檢測(cè)到目的蛋白,但突變蛋白的胞外分泌量較野生蛋白明顯減少。 3.細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),CEACAM16野生蛋白和G169R突變蛋白均主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,無(wú)明顯的區(qū)域聚集現(xiàn)象,且兩者在胞內(nèi)的分布無(wú)明顯差異。 結(jié)論：CEACAM16基因的新突變G169R可致突變蛋白的細(xì)胞外分泌量減少,但不影響突變蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布。
【關(guān)鍵詞】：CEACAM16基因 新突變 分泌蛋白 功能
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R764.43
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 中英文~.略詞表11-12
• 前言12-14
• 第一章 CEACAM16野生型基因重組真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒及其突變型的構(gòu)建及鑒定14-37
• 1.1 引言14
• 1.2 材料與方法14-29
• 1.3 結(jié)果29-35
• 1.4 討論35-37
• 第二章 CEACAM16野生型和突變型質(zhì)粒的蛋白表達(dá)研究37-53
• 2.1 引言37
• 2.2 材料與方法37-48
• 2.3 結(jié)果48-49
• 2.4 討論49-53
• 第三章 CEACAM16野生型和突變型蛋白亞細(xì)胞定位的實(shí)驗(yàn)研究53-61
• 3.1 引言53
• 3.2 材料與方法53-58
• 3.3 結(jié)果58-59
• 3.4 討論59-61
• 第四章 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 綜述65-82
• 參考文獻(xiàn)74-82
• 致謝82-83

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 文顯梅;魏蕾;張京偉;彭小春;王婷婷;張利軍;李華;;苦參堿對(duì)HeLa細(xì)胞粘附和移動(dòng)的抑制作用及機(jī)制[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年02期

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本文編號(hào)：1008854