本文關(guān)鍵詞：慢性高眼壓視網(wǎng)膜線粒體復(fù)合物活性及氧化應(yīng)激的動(dòng)態(tài)變化研究

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【摘要】：目的： 系統(tǒng)研究慢性高眼壓視網(wǎng)膜五個(gè)線粒體復(fù)合物活性及氧化應(yīng)激狀態(tài)的動(dòng)態(tài)變化,探索高眼壓視網(wǎng)膜氧化損傷機(jī)制。 方法： 在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中采用兩種慢性動(dòng)物模型,一種為挪威鼠前房注射磁珠誘導(dǎo)慢性高眼壓,另一種為色素播散性青光眼模型DBA/2J小鼠。分別在眼壓升高不同時(shí)間取視網(wǎng)膜,制備組織勻漿。 在體外實(shí)驗(yàn)中將星形膠質(zhì)細(xì)胞加壓培養(yǎng),壓力設(shè)為30mmHg,模擬慢性高眼壓。分別在加壓后不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞,制備細(xì)胞勻漿。 生物化學(xué)方法檢測(cè)五個(gè)線粒體復(fù)合物活性及總SOD活性,Cu,Zn-SOD活性,Mn-SOD活性,MDA及ROS含量變化。使用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理數(shù)據(jù)。 結(jié)果： 1.90%實(shí)驗(yàn)組挪威鼠經(jīng)磁珠前房注射后眼壓穩(wěn)定升高。2.高眼壓導(dǎo)致視網(wǎng)膜線粒體復(fù)合物活性改變 ①挪威鼠 ⅰ.9周齡組線粒體復(fù)合物Ⅰ的活性在高眼壓后前4周時(shí)主要呈現(xiàn)下降趨勢(shì)(p0.05),到第4周時(shí)達(dá)最低值為0.0333±0.0056μmol·min·mgpro-1(p0.001),之后逐漸回升,到高壓后6周時(shí)接近正常值為0.1071±0.0056μmol·min·mgpro-1;22周齡組線粒體復(fù)合物Ⅰ的活性在高眼壓后整體呈現(xiàn)上升趨勢(shì),于高壓后第4周時(shí)達(dá)最高值為0.2485±0.0029μmol·min·mgpro-1(p0.05),之后迅速回降,到高壓后6周時(shí)降至0.0800±0.001μmol·min·mgpro-1,接近正常值。ⅱ.兩年齡組線粒體復(fù)合物Ⅱ活性在高眼壓后均降低,9周齡組于第2周降至最低值為0.0143±0.0003μmol·min·mgpro-1(p0.001);而22周齡組于第1周即降至最低為0.0092+0.0023μmol·min·mgpro-1(p0.05),其后雖有所回升,但仍顯著低于正常值(p0.05)。 ⅲ.兩個(gè)年齡組線粒體復(fù)合物Ⅲ活性在高壓后第一周即迅速下降,分別降低了63.06%,80.04%(p0.001),之后隨著加壓時(shí)間的延長(zhǎng)其活性逐漸回升,到第6周時(shí)均顯著高于正常值,分別為0.0694±0.0000(p0.05)和0.0599±0.0022(p0.001) μmol·min·mpro-1。 ⅳ.9周齡和22周齡組線粒體復(fù)合物Ⅳ活性在高眼壓后前3周均逐漸升高,到第3周時(shí)升至最高,分別為0.1294+0.0076和0.1249±0.0126μmol·min-1·mg-1(p0.001),之后迅速回降,到高壓6周時(shí)分別為0.0330±0.0033和20.0263±0.0031μmol·min·mgpro-1,仍顯著高于正常值(p0.05)ⅴ.9周齡組線粒體復(fù)合物V的活性在高眼壓后持續(xù)緩慢下降,到高壓6周時(shí)已降低了65.63%(p0.001)；而22周齡組線粒體復(fù)合物V的活性在眼壓升高后即緩慢升高,到第4周時(shí)是對(duì)照組的1.3倍(p0.05),其后迅速下降,到第6周時(shí)已降低了68.80%,顯著低于正常對(duì)照組(p0.05)。 ②DBA/2Jⅰ.線粒體復(fù)合物Ⅰ活性升高(p0.001)。 ⅱ.復(fù)合物Ⅱ-Ⅴ活性均降低(p0.01)。 ③體外加壓的星形膠質(zhì)細(xì)胞ⅰ.復(fù)合物Ⅰ-Ⅳ活性加壓后均降低,其中復(fù)合物Ⅱ跟Ⅳ持續(xù)緩慢下降,而Ⅰ、Ⅲ迅速大幅度降低,在加壓24小時(shí)時(shí)已分別降低了88.66%(p0.001),68.39%(p0.01)。然而復(fù)合物Ⅰ的活性之后緩慢回升,到第6周時(shí)升至0.4236±0.0018μmol·min·mgpro-1,但仍顯著低于正常值(p0.001)；而復(fù)合物Ⅲ的活性仍持續(xù)降低,到加壓96小時(shí)時(shí)達(dá)最低值(下降了82.11%,p0.01)。 ⅱ.復(fù)合物V活性隨加壓時(shí)間逐漸升高,到加壓120h時(shí)升高了7.69倍(p0.001)。 3.高壓下Mn-SOD活性持續(xù)顯著下降。 ①挪威鼠 22周齡組挪威鼠T-SOD及Cu,Zn-SOD活性在高壓前2周時(shí)分別升至71.9914±0.0025(p0.001),65.1074±3.9882(p0.01)U/mgprot,在高壓3周及4周時(shí)又迅速降低,但到高壓6周時(shí)分別再次升高至72.1602±0.0006(p0.001),68.5408±0.2388(p0.01)U/mgproto而Mn-SOD活性在加壓過(guò)程中持續(xù)下降,到第6周時(shí)已降低了75.36%(p0.05)。同時(shí)MDA含量隨T-SOD活性變化而變化。到高壓第2、4、6周時(shí)分別增加了2.03倍(p0.001)、0.93倍(p0.001)、1.48倍(p0.001)。 9周齡組挪威鼠T-SOD活性在高壓前2周時(shí)分別降低了24.65%(p0.001)、69.29%,從高壓第3周期活性開(kāi)始回升,但第3、4周時(shí)仍顯著低于正常值,分別降低了38.35%(p0.001)、28.78%(p0.001),到高壓第6周時(shí)其活性才顯著高于正常值,為76.5028±1.2215(p0.05)U/mgproto同時(shí)MDA含量隨T-SOD活性變化而變化。到高壓第4、6周時(shí)已分別增加了57.58%(p0.01)、92.16%(p0.05)。 ②DBA/2J和C57BL/6 T-SOD, Cu,Zn-SOD, Mn-SOD活性分別降低了10.77%,10.49%,43.29%(p0.05),MDA含量下降了19.44%(p0.05)。 ③體外加壓的AS T-SOD, Cu,Zn-SOD, Mn-SOD活性,MDA含量均持續(xù)下降。 4.視網(wǎng)膜內(nèi)ROS含量增加。 結(jié)論： 1高眼壓導(dǎo)致線粒體復(fù)合物活性異常,視網(wǎng)膜內(nèi)存在氧化應(yīng)激。 2不同鼠齡視網(wǎng)膜線粒體復(fù)合物活性對(duì)壓力損傷的反應(yīng)性和代償能力不盡相同。變化特點(diǎn)不盡相同。 3壓力作用下,線粒體內(nèi)Mn-SOD損傷較早較嚴(yán)重,導(dǎo)致線粒體內(nèi)較早出現(xiàn)氧化失衡。 4線粒體復(fù)合物Ⅲ是慢性高眼壓視網(wǎng)膜內(nèi)ROS產(chǎn)生的主要部位。
【關(guān)鍵詞】：慢性高眼壓 線粒體復(fù)合物活性 氧化應(yīng)激 超氧化物歧化酶 脂質(zhì)過(guò)氧化物
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R774.1
【目錄】：

• 目錄3-4
• 縮略詞表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-16
• 材料與方法16-24
• 結(jié)果24-41
• 分析與討論41-50
• 全文小結(jié)50-51
• References51-58
• 致謝58-59
• 文獻(xiàn)綜述59-69
• 參考文獻(xiàn)65-69

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本文編號(hào)：1001616