本文關(guān)鍵詞：內(nèi)皮素-1在心肌缺血再灌注損傷中的作用研究

  更多相關(guān)文章： Langendorff灌流 缺血再灌注損傷 內(nèi)皮素-1 SKF96365 LOE908心肌保護(hù)

【摘要】：對(duì)于急性心肌梗死病人來說,早期而又有效的實(shí)施缺血心肌的再灌注是減少梗死面積和提高臨床轉(zhuǎn)歸的最有效的方法。但是,缺血心肌的血流的重新供應(yīng)矛盾地導(dǎo)致心肌的損傷。這種現(xiàn)象稱為缺血再灌注損傷(Ischemia reperfusion injury, I/R)。I/R是多因素、多機(jī)制相互作用、相互發(fā)展的結(jié)果,其中主要的病理機(jī)制包括氧化應(yīng)激反應(yīng)、自由基損傷、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞內(nèi)或線粒體內(nèi)鈣超載等。目前,缺血再灌注損傷的防治措施主要包括方法和藥物兩方面。缺血預(yù)適應(yīng)(ischemia preconditioning, IPC)和缺血后適應(yīng)(ischemia postconditioning, IPO)都是減少再灌注損傷的有效措施,只是處理的時(shí)程不同而已。藥物處理也是同理。鈣超載是I/R的重要作用因素,多種鈣離子通道參與其中,那么,鈣離子拮抗劑的作用及其可能的作用機(jī)制就值得關(guān)注。內(nèi)皮素-1 (Endothelin-1,ET-1)是由內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的21氨基酸肽,具有強(qiáng)有力的血管收縮作用,主要通過激活ETA型和ETB型受體發(fā)揮生物效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn),在急性心肌梗死以及對(duì)其進(jìn)行即刻的血管成形術(shù)進(jìn)行治療后,均發(fā)現(xiàn)存在血漿中ET-1含量升高的現(xiàn)象。這表明ET-1在缺血再灌注的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。但是,一直以來,ET-1在缺血再灌注損傷中的具體作用卻存在著爭議。有關(guān)ET-1有助于梗死的發(fā)展以及減少梗死面積的報(bào)道都有出現(xiàn)�？梢�,實(shí)驗(yàn)方案和實(shí)驗(yàn)條件的不同影響ET-1的作用。而不同濃度的ET-1產(chǎn)生的影響是否相同報(bào)道很少。在細(xì)胞外存在鈣離子的情況下,內(nèi)皮素-1產(chǎn)生的動(dòng)脈環(huán)的收縮作用具有劑量依賴性。如果能夠阻斷ET-1產(chǎn)生的強(qiáng)烈收縮血管作用,而同時(shí)保留ET-1的維持血管張力作用,將極大改善缺血再灌注損傷所帶來的危害。新型鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908激活不同的鈣離子通道,對(duì)不同濃度的ET-1起著不同的抑制作用。研究發(fā)現(xiàn)在大鼠血管平滑肌細(xì)胞(VSMC),低濃度的ET-1引起的平滑肌收縮能夠被鈣離子拮抗劑LOE908或SKF96365所阻斷,而高濃度的ET-1所引起的收縮能被LOE908或SKF96365減弱,但是不能被完全阻斷,如聯(lián)合使用LOE908和SKF96365則可完全阻斷收縮。可見,阻斷ET-1產(chǎn)生的強(qiáng)烈收縮血管作用,而同時(shí)保留ET-1維持正常血管張力的作用是可行的。基于以上認(rèn)識(shí),采用離體Langendorff灌注模型和在體心臟缺血再灌注模型,對(duì)鈣離子拮抗劑SKF96365、LOE908和ET-1進(jìn)行綜合研究。觀察不同濃度ET-1對(duì)于I/R的影響以及可能的相關(guān)機(jī)制；鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908對(duì)于ET-1的影響以及是否產(chǎn)生心肌保護(hù)作用。第一章ET-1對(duì)離體心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用目的本研究將通過建立Langendorff離體心臟灌注模型,并在此模型的基礎(chǔ)上研究不同濃度的ET-1對(duì)于心臟的不同作用及其可能的相關(guān)機(jī)制,再進(jìn)一步探討SKF96365和LOE908對(duì)于ET-1的影響以及對(duì)心臟的保護(hù)作用。材料與方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本研究選用體重180-220g的雄性SD大鼠,購于中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用及處理方法,嚴(yán)格按照廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)的要求進(jìn)行,并盡可能減少動(dòng)物的使用數(shù)量。2.動(dòng)物L(fēng)angendorff模型的制備及分組將離體大鼠心臟懸于Langendorff灌注裝置,以恒壓恒溫的方式進(jìn)行逆灌。停止K-H灌注液的灌注即為全心缺血,然后再恢復(fù)灌注。大鼠隨機(jī)分為五組：1)缺血再灌注(I/R)組：用K-H液心臟灌注30min,然后停止灌注液造成全心缺血30min,再恢復(fù)灌注60min。2)ET-1預(yù)處理組：在I/R組的基礎(chǔ)上,在缺血一開始,分別單次注射ET-10.1nM, 1nM, 10nM。3) BQ123處理組(BQ123組)：在ET-11 nM組的基礎(chǔ)上,在注射ET-1的前5 min開始持續(xù)灌注2μMBQ-123。4) SKF96365處理組：在ET-1 10 nM組的基礎(chǔ)上,在注射ET-1的前5 min開始持續(xù)灌注30μM SKF96365。5) LOE908處理組(LOE908組)：在ET-1 10 nM組的基礎(chǔ)上,在注射ET-1的前5 min開始持續(xù)灌注30μMLOE908。3.各項(xiàng)指標(biāo)的觀察應(yīng)用PcLab-UE生物醫(yī)學(xué)信號(hào)采集處理系統(tǒng)實(shí)時(shí)觀察分析并且記錄灌注10min、30min以及再灌注后5 min,10 min,30 min和60 min各個(gè)時(shí)刻的左室最大心室壓、左室最小心室壓、左室舒張末壓(LVEDP)以及心率。測(cè)定各個(gè)時(shí)點(diǎn)一分鐘內(nèi)的冠脈流量(CF)。收集恢復(fù)灌注后5min的冠脈流出液,檢測(cè)其中的乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的含量。對(duì)再灌注結(jié)束的大鼠心臟,留取左心室進(jìn)行HE染色并進(jìn)行觀察。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析,所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。組間均數(shù)多重比較應(yīng)用單因素方差分析(One-Way ANOVA),方差齊則采用LSD方法,不齊則采用Dunntt-T3方法。兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析。重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的均數(shù)比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析。P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.不同濃度ET-1對(duì)于離體心臟功能的不同影響0.1nM和1 nM ET-1明顯改善了心功能,表現(xiàn)為LVDP明顯升高(93.89±21.84,80.35±8.62mmHg), LVEDP顯著下降(8.05±2.64,16.17±7.09mmHg),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。心肌酶LDH和CK的含量顯著降低(P=0.000和0.004,P=0.000和0.007),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。組織病理學(xué)檢查顯示損傷減輕。然而10nM ET-1在CF方面(4.33±1.03 ml/min)有著顯著下降(P0.05),顯示其強(qiáng)有力的收縮作用,不利于心肌的保護(hù)。2.ETA受體在ET-1心肌保護(hù)中的作用BQ-123抑制了ET-1的保護(hù)作用,使得LVDP明顯降低(26.22±6.78 mmHg),而LVEDP顯著升高(14.80±3.87 mmHg),心功能減弱,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LDH和CK的含量顯著增加(P=0.032和0.023),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。組織病理學(xué)檢查顯示損傷加重�？梢奅TA受體可能參與其中。3.SKF96365和LOE908對(duì)于ET-1在心肌的影響SKF96365和LOE908明顯改善了心功能,LVDP明顯升高(82.08±17.28,70.58±7.45mmHg),LVEDP顯著下降(9.50±3.43,和11.34±3.69 mmHg),CF明顯增加(8.17±0.75、7.50±1.38 ml/min),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。心肌酶LDH和CK的含量顯著降低(P=0.000和0.012,P=0.000和0.021)。組織病理學(xué)檢查顯示損傷減輕。SKF96365和LOE908對(duì)于10 nM ET-1的血管收縮作用有一定的抑制作用,起到增強(qiáng)其心肌的保護(hù)作用。第二章SKF96365和LOE908對(duì)在體心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用目的本研究將通過建立在體心臟缺血再灌注模型,并在此模型的基礎(chǔ)上研究SKF96365和LOE908對(duì)于ET-1的影響以及對(duì)心臟的保護(hù)作用。材料與方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本研究選用體重180-220g的雄性SD大鼠,購于中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用及處理方法,嚴(yán)格按照廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)的要求進(jìn)行,并盡可能減少動(dòng)物的使用數(shù)量。2.動(dòng)物在體缺血再灌模型的制備及分組大鼠經(jīng)由氣管內(nèi)插管進(jìn)行輔助呼吸。采用左側(cè)開胸術(shù)暴露心臟,對(duì)左側(cè)冠狀動(dòng)脈前降支進(jìn)行結(jié)扎造成缺血,然后松開結(jié)扎恢復(fù)血流灌注。大鼠隨機(jī)分為四組：1)假性手術(shù)組：心臟適應(yīng)10min后,5-0絲線僅僅是穿過左冠脈前降支并沒有縫扎30min,然后去掉絲線,總體時(shí)間100min。2)缺血再灌注(I/R)組：心臟適應(yīng)10min后,5-0絲線縫扎左冠脈前降支30min,然后松開絲線再恢復(fù)灌注60min。3) SKF96365處理組：在I/R組的基礎(chǔ)上,在恢復(fù)灌注的即刻靜脈注射0.06mg/kg SKF96365。4) LOE908處理組(LOE908組)：在I/R組的基礎(chǔ)上,在恢復(fù)灌注的即刻靜脈注射0.1mg/kg LOE908�！�3.各項(xiàng)指標(biāo)的觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,留取大鼠頸動(dòng)脈血液,檢測(cè)其中的乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及內(nèi)皮素-1(ET-1)的含量。對(duì)再灌注結(jié)束的大鼠心臟,進(jìn)行TTC染色測(cè)定其中的梗死面積。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析,所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間均數(shù)比較應(yīng)用單因素方差分析(One-Way ANOVA),方差齊則采用LSD方法,不齊則采用Dunntt-T3方法。P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908對(duì)心肌組織酶學(xué)指標(biāo)的影響大鼠心臟缺血再灌注后LDH (1356.33±186.75 U/L)和CK-MB (651.00± 58.07 U/L)均顯著性的增高(P=0.000),表明模型成功。運(yùn)用SKF96365和LOE908后,與I/R組相比,LDH(1077.00±119.26 U/L和1070.17±105.84 U/L)和CK-MB (529.00±51.80 U/L和517.50±112.95 U/L)均顯著降低(P=0.004和0.003),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908對(duì)血漿中內(nèi)皮素-1濃度的影響大鼠心臟缺血再灌注后,ET-1的含量(74.97±6.64 pg/ml)顯著增高(P=0.000)。而使用SKF96365和LOE908后,ET-1的含量(57.88±6.54 pg/ml和62.85±6.03 pg/ml)均有著不同程度的降低,并且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000和0.002)�？梢奡KF96365和LOE908對(duì)ET-1有著抑制作用。3.大鼠心臟梗死面積的變化大鼠心臟缺血再灌注的措施增加了心肌的梗死面積(48.00±2.60%),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。運(yùn)用SKF96365(29.03±3.15%)和LOE908(30.80±2.83%)后,梗死面積有著顯著降低(P=0.000)。這和心肌酶學(xué)指標(biāo)的結(jié)果基本一致。全文結(jié)論1.不同濃度的內(nèi)皮素-1對(duì)于缺血再灌注損傷模型的心肌有著不同的作用：低濃度內(nèi)皮素-1有著顯著的保護(hù)作用,而高濃度內(nèi)皮素-1所表現(xiàn)的強(qiáng)烈收縮血管的作用,對(duì)心肌產(chǎn)生一定的損傷。2.內(nèi)皮素A受體可能參與內(nèi)皮素-1的心肌保護(hù)作用機(jī)制。3.鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908均能抑制高濃度ET-1的強(qiáng)烈血管收縮作用以增強(qiáng)其產(chǎn)生的心肌保護(hù)作用。4.鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908具有心肌保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：Langendorff灌流 缺血再灌注損傷 內(nèi)皮素-1 SK&F96365 LOE908心肌保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R542.2
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-17
• 前言17-24
• 第一章 ET-1對(duì)離體心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用24-43
• 1.1 材料24-26
• 1.2 方法26-31
• 1.3 結(jié)果31-43
• 第二章 SK&F96365和LOE908對(duì)在體心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用43-54
• 2.1 材料43-44
• 2.2 方法44-49
• 2.3 結(jié)果49-54
• 討論54-59
• 全文結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-70
• 英文縮略詞索引表70-73
• 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果73-74
• 致謝74-75

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王悅喜;心肌缺血預(yù)適應(yīng)中蛋自激酶C作用及其機(jī)制探討[J];醫(yī)學(xué)綜述;2000年09期

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本文編號(hào)：976130