本文關鍵詞：內皮素-1在心肌缺血再灌注損傷中的作用研究

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【摘要】：對于急性心肌梗死病人來說,早期而又有效的實施缺血心肌的再灌注是減少梗死面積和提高臨床轉歸的最有效的方法。但是,缺血心肌的血流的重新供應矛盾地導致心肌的損傷。這種現(xiàn)象稱為缺血再灌注損傷(Ischemia reperfusion injury, I/R)。I/R是多因素、多機制相互作用、相互發(fā)展的結果,其中主要的病理機制包括氧化應激反應、自由基損傷、細胞凋亡和細胞內或線粒體內鈣超載等。目前,缺血再灌注損傷的防治措施主要包括方法和藥物兩方面。缺血預適應(ischemia preconditioning, IPC)和缺血后適應(ischemia postconditioning, IPO)都是減少再灌注損傷的有效措施,只是處理的時程不同而已。藥物處理也是同理。鈣超載是I/R的重要作用因素,多種鈣離子通道參與其中,那么,鈣離子拮抗劑的作用及其可能的作用機制就值得關注。內皮素-1 (Endothelin-1,ET-1)是由內皮細胞產(chǎn)生的21氨基酸肽,具有強有力的血管收縮作用,主要通過激活ETA型和ETB型受體發(fā)揮生物效應。研究發(fā)現(xiàn),在急性心肌梗死以及對其進行即刻的血管成形術進行治療后,均發(fā)現(xiàn)存在血漿中ET-1含量升高的現(xiàn)象。這表明ET-1在缺血再灌注的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。但是,一直以來,ET-1在缺血再灌注損傷中的具體作用卻存在著爭議。有關ET-1有助于梗死的發(fā)展以及減少梗死面積的報道都有出現(xiàn)�？梢�,實驗方案和實驗條件的不同影響ET-1的作用。而不同濃度的ET-1產(chǎn)生的影響是否相同報道很少。在細胞外存在鈣離子的情況下,內皮素-1產(chǎn)生的動脈環(huán)的收縮作用具有劑量依賴性。如果能夠阻斷ET-1產(chǎn)生的強烈收縮血管作用,而同時保留ET-1的維持血管張力作用,將極大改善缺血再灌注損傷所帶來的危害。新型鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908激活不同的鈣離子通道,對不同濃度的ET-1起著不同的抑制作用。研究發(fā)現(xiàn)在大鼠血管平滑肌細胞(VSMC),低濃度的ET-1引起的平滑肌收縮能夠被鈣離子拮抗劑LOE908或SKF96365所阻斷,而高濃度的ET-1所引起的收縮能被LOE908或SKF96365減弱,但是不能被完全阻斷,如聯(lián)合使用LOE908和SKF96365則可完全阻斷收縮�？梢�,阻斷ET-1產(chǎn)生的強烈收縮血管作用,而同時保留ET-1維持正常血管張力的作用是可行的�；谝陨险J識,采用離體Langendorff灌注模型和在體心臟缺血再灌注模型,對鈣離子拮抗劑SKF96365、LOE908和ET-1進行綜合研究。觀察不同濃度ET-1對于I/R的影響以及可能的相關機制；鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908對于ET-1的影響以及是否產(chǎn)生心肌保護作用。第一章ET-1對離體心臟缺血再灌注損傷的保護作用目的本研究將通過建立Langendorff離體心臟灌注模型,并在此模型的基礎上研究不同濃度的ET-1對于心臟的不同作用及其可能的相關機制,再進一步探討SKF96365和LOE908對于ET-1的影響以及對心臟的保護作用。材料與方法1.實驗動物本研究選用體重180-220g的雄性SD大鼠,購于中山大學實驗動物中心。實驗動物的使用及處理方法,嚴格按照廣東省醫(yī)學科學院動物實驗倫理委員會的要求進行,并盡可能減少動物的使用數(shù)量。2.動物Langendorff模型的制備及分組將離體大鼠心臟懸于Langendorff灌注裝置,以恒壓恒溫的方式進行逆灌。停止K-H灌注液的灌注即為全心缺血,然后再恢復灌注。大鼠隨機分為五組：1)缺血再灌注(I/R)組：用K-H液心臟灌注30min,然后停止灌注液造成全心缺血30min,再恢復灌注60min。2)ET-1預處理組：在I/R組的基礎上,在缺血一開始,分別單次注射ET-10.1nM, 1nM, 10nM。3) BQ123處理組(BQ123組)：在ET-11 nM組的基礎上,在注射ET-1的前5 min開始持續(xù)灌注2μMBQ-123。4) SKF96365處理組：在ET-1 10 nM組的基礎上,在注射ET-1的前5 min開始持續(xù)灌注30μM SKF96365。5) LOE908處理組(LOE908組)：在ET-1 10 nM組的基礎上,在注射ET-1的前5 min開始持續(xù)灌注30μMLOE908。3.各項指標的觀察應用PcLab-UE生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)實時觀察分析并且記錄灌注10min、30min以及再灌注后5 min,10 min,30 min和60 min各個時刻的左室最大心室壓、左室最小心室壓、左室舒張末壓(LVEDP)以及心率。測定各個時點一分鐘內的冠脈流量(CF)。收集恢復灌注后5min的冠脈流出液,檢測其中的乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的含量。對再灌注結束的大鼠心臟,留取左心室進行HE染色并進行觀察。4.統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0軟件進行分析,所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差(x±s)表示。組間均數(shù)多重比較應用單因素方差分析(One-Way ANOVA),方差齊則采用LSD方法,不齊則采用Dunntt-T3方法。兩組間均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗分析。重復測量數(shù)據(jù)的均數(shù)比較采用重復測量方差分析。P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。結果1.不同濃度ET-1對于離體心臟功能的不同影響0.1nM和1 nM ET-1明顯改善了心功能,表現(xiàn)為LVDP明顯升高(93.89±21.84,80.35±8.62mmHg), LVEDP顯著下降(8.05±2.64,16.17±7.09mmHg),有統(tǒng)計學意義(P0.05)。心肌酶LDH和CK的含量顯著降低(P=0.000和0.004,P=0.000和0.007),有統(tǒng)計學意義(P0.05)。組織病理學檢查顯示損傷減輕。然而10nM ET-1在CF方面(4.33±1.03 ml/min)有著顯著下降(P0.05),顯示其強有力的收縮作用,不利于心肌的保護。2.ETA受體在ET-1心肌保護中的作用BQ-123抑制了ET-1的保護作用,使得LVDP明顯降低(26.22±6.78 mmHg),而LVEDP顯著升高(14.80±3.87 mmHg),心功能減弱,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。LDH和CK的含量顯著增加(P=0.032和0.023),有統(tǒng)計學意義(P0.05)。組織病理學檢查顯示損傷加重。可見ETA受體可能參與其中。3.SKF96365和LOE908對于ET-1在心肌的影響SKF96365和LOE908明顯改善了心功能,LVDP明顯升高(82.08±17.28,70.58±7.45mmHg),LVEDP顯著下降(9.50±3.43,和11.34±3.69 mmHg),CF明顯增加(8.17±0.75、7.50±1.38 ml/min),有統(tǒng)計學意義(P0.05)。心肌酶LDH和CK的含量顯著降低(P=0.000和0.012,P=0.000和0.021)。組織病理學檢查顯示損傷減輕。SKF96365和LOE908對于10 nM ET-1的血管收縮作用有一定的抑制作用,起到增強其心肌的保護作用。第二章SKF96365和LOE908對在體心臟缺血再灌注損傷的保護作用目的本研究將通過建立在體心臟缺血再灌注模型,并在此模型的基礎上研究SKF96365和LOE908對于ET-1的影響以及對心臟的保護作用。材料與方法1.實驗動物本研究選用體重180-220g的雄性SD大鼠,購于中山大學實驗動物中心。實驗動物的使用及處理方法,嚴格按照廣東省醫(yī)學科學院動物實驗倫理委員會的要求進行,并盡可能減少動物的使用數(shù)量。2.動物在體缺血再灌模型的制備及分組大鼠經(jīng)由氣管內插管進行輔助呼吸。采用左側開胸術暴露心臟,對左側冠狀動脈前降支進行結扎造成缺血,然后松開結扎恢復血流灌注。大鼠隨機分為四組：1)假性手術組：心臟適應10min后,5-0絲線僅僅是穿過左冠脈前降支并沒有縫扎30min,然后去掉絲線,總體時間100min。2)缺血再灌注(I/R)組：心臟適應10min后,5-0絲線縫扎左冠脈前降支30min,然后松開絲線再恢復灌注60min。3) SKF96365處理組：在I/R組的基礎上,在恢復灌注的即刻靜脈注射0.06mg/kg SKF96365。4) LOE908處理組(LOE908組)：在I/R組的基礎上,在恢復灌注的即刻靜脈注射0.1mg/kg LOE908�！�3.各項指標的觀察實驗結束后,留取大鼠頸動脈血液,檢測其中的乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及內皮素-1(ET-1)的含量。對再灌注結束的大鼠心臟,進行TTC染色測定其中的梗死面積。4.統(tǒng)計學方法采用SPSS 13.0軟件進行分析,所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差表示,組間均數(shù)比較應用單因素方差分析(One-Way ANOVA),方差齊則采用LSD方法,不齊則采用Dunntt-T3方法。P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。結果1.鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908對心肌組織酶學指標的影響大鼠心臟缺血再灌注后LDH (1356.33±186.75 U/L)和CK-MB (651.00± 58.07 U/L)均顯著性的增高(P=0.000),表明模型成功。運用SKF96365和LOE908后,與I/R組相比,LDH(1077.00±119.26 U/L和1070.17±105.84 U/L)和CK-MB (529.00±51.80 U/L和517.50±112.95 U/L)均顯著降低(P=0.004和0.003),有統(tǒng)計學意義。2.鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908對血漿中內皮素-1濃度的影響大鼠心臟缺血再灌注后,ET-1的含量(74.97±6.64 pg/ml)顯著增高(P=0.000)。而使用SKF96365和LOE908后,ET-1的含量(57.88±6.54 pg/ml和62.85±6.03 pg/ml)均有著不同程度的降低,并且均有統(tǒng)計學意義(P=0.000和0.002)�？梢奡KF96365和LOE908對ET-1有著抑制作用。3.大鼠心臟梗死面積的變化大鼠心臟缺血再灌注的措施增加了心肌的梗死面積(48.00±2.60%),具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。運用SKF96365(29.03±3.15%)和LOE908(30.80±2.83%)后,梗死面積有著顯著降低(P=0.000)。這和心肌酶學指標的結果基本一致。全文結論1.不同濃度的內皮素-1對于缺血再灌注損傷模型的心肌有著不同的作用：低濃度內皮素-1有著顯著的保護作用,而高濃度內皮素-1所表現(xiàn)的強烈收縮血管的作用,對心肌產(chǎn)生一定的損傷。2.內皮素A受體可能參與內皮素-1的心肌保護作用機制。3.鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908均能抑制高濃度ET-1的強烈血管收縮作用以增強其產(chǎn)生的心肌保護作用。4.鈣離子拮抗劑SKF96365和LOE908具有心肌保護作用。
【關鍵詞】：Langendorff灌流 缺血再灌注損傷 內皮素-1 SK&F96365 LOE908心肌保護
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R542.2
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-17
• 前言17-24
• 第一章 ET-1對離體心臟缺血再灌注損傷的保護作用24-43
• 1.1 材料24-26
• 1.2 方法26-31
• 1.3 結果31-43
• 第二章 SK&F96365和LOE908對在體心臟缺血再灌注損傷的保護作用43-54
• 2.1 材料43-44
• 2.2 方法44-49
• 2.3 結果49-54
• 討論54-59
• 全文結論59-60
• 參考文獻60-70
• 英文縮略詞索引表70-73
• 攻讀碩士學位期間研究成果73-74
• 致謝74-75

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王悅喜;心肌缺血預適應中蛋自激酶C作用及其機制探討[J];醫(yī)學綜述;2000年09期

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本文編號：976130