本文關(guān)鍵詞：Neuregulin-1對冠狀動脈平滑肌細胞功能的影響

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【摘要】：摘要內(nèi)容目的檢測Neuregulin-1因子處理對冠狀動脈平滑肌細胞增殖、遷移、存活和蛋白表達的影響。方法選用第3-6次傳代的人冠脈平滑肌細胞(HCASMC),當培養(yǎng)的細胞鋪滿瓶底的90%左右或者長成融合單層后即可加入Neuregulin-1(NRG-1,下同)進行實驗。依據(jù)不同濃度NRG-1處理正常或缺血缺氧培養(yǎng)條件下的HCASMC進行實驗分組。運用MTT法檢測不同濃度的NRG-1對HCASMC增殖影響,Transwe1124孔板法檢測不同濃度的NRG-1對HCASMC遷移影響；Hoechst 33342核染色法檢測NRG-1對HCASMC凋亡率的影響；Western blot檢測正常培養(yǎng)條件下NRG、ErbB2/3/4、磷酸化ErbB2受體、磷酸化ErbB3受體、磷酸化ErbB4受體以及缺血缺氧條件下促血管生成因子-1(Ang-1)、促血管生成因子-2(Ang-2)和血管內(nèi)皮生成因子(VEGF)在HCASMC中的表達水平。結(jié)果1、HCASMC生長特點：培養(yǎng)的HCASMC為貼壁細胞,形態(tài)呈成纖維樣的長梭形、桿狀或者蚯蚓型；缺血缺氧條件下形態(tài)比較瘦長,數(shù)量減少,生長緩慢,易成團,細胞碎片較多。2、正常培養(yǎng)時,HCASMC表達ErbB2/3/4、不表達NRG；加入NRG-1處理后的HCASMC磷酸化ErbB2/3/4增加(P0.05),加入抑制劑后磷酸化ErbB2/3/4的表達減少(P0.05)；3、不同濃度的NRG-1對HCASMC增殖影響結(jié)果不同,10ng/mlNRG-1組促進HCASMC增殖的作用最明顯[(0.314±0.044)(0.239±0.044),OD值,下同,P0.05],在加入抑制劑后,這種促進增殖的作用是受到抑制的[(0.188±0.039)(0.314±0.044),P0.05)]；在加入抑制劑的50ng/mlNRG-1組,促進HCASMC增殖作用不明顯[(0.227±0.045)(0.239±.0441),P0.05)]。4、不同濃度的NRG-1對HCASMC遷移影響結(jié)果不同,在9H內(nèi),10ng/ml組促進HCASMC遷移的作用最明顯[(32.2±5.9)個(25士3.8)個,P0.05],在加入抑制劑后,這種促進增殖的作用是受到抑制的[(17.1±4.5)個(32.2±5.9)個,P0.05],在加入抑制劑的50ng/ml NRG-1組,促進HCASMC遷移作用不明顯[(21.7±4.9)個(25±3.8)個,P0.05]。5、在熒光顯微鏡下,Hoechst 33342使缺血缺氧作用24H后的HCASMC凋亡細胞容易辨認,核固縮、發(fā)亮、碎裂、成團即為凋亡細胞,而細胞生長數(shù)量也明顯減少,和對照組比較,缺血缺氧HCASMC凋亡率(凋亡率=凋亡細胞數(shù)/細胞總數(shù)%)增加[(12.417±3.5)%(4.841±1.1)%,P0.05)]；在加入NRG-1處理后的NRG-1組的細胞凋亡率,較缺血缺氧組明顯降低[(6.720±1.3)%(12.417±3.5)%,P0.05)]；與NRG-1+抑制劑組比較,NRG-1降低凋亡率的作用被抑制[(6.720+1.3)%(11.368±2.4)%,P0.05)]。6、缺血缺氧時,HCASMC表達VEGF、Ang-1較對照組增加(P0.05),加入100ng/ml的NRG-1處理后,VEGF、Ang-1的表達較缺血缺氧組增加(P0.05),加入抑制劑后的NRG-1+抑制劑組,VEGF、Ang-1的表達減少(P0.05),而對照組和實驗組的Ang-2表達暫無明顯差異(P0.05)。結(jié)論1、HCASMC表達ErbB2/3/4、不表達NRG, NRG-1干預(yù)后,能促進HCASMC磷酸化ErbB2/3/4的表達,說明NRG-1可激活并增強NRG/ErbB信號通路；2、不同濃度的NRG-1干預(yù)對HCASMC增殖的影響不同,濃度為10ng/ml的NRG-1能明顯促進HCASMC增殖,可以推測,合適濃度的NRG-1通過促進HCASMC的增殖,從而促進其在冠脈血管生成發(fā)揮作用；3、不同濃度的NRG-1干預(yù)對HCASMC遷移的影響不同,濃度為10ng/ml的NRG-1能明顯促進HCASMC遷移,可以推測,合適濃度的NRG-1通過促進HCASMC的遷移,從而促進其在冠脈血管生成發(fā)揮作用。4、缺血缺氧時,NRG-1對HCASMC凋亡產(chǎn)生影響,主要為降低HCASMC的凋亡率,從而保護HCASMC。5、缺血缺氧時NRG-1能促進HCASMC表達VEGF、Ang-1,從而促進冠脈血管生成。
【關(guān)鍵詞】：neuregulin-1(NRG-1) 人冠脈平滑肌細胞 增殖 遷移 凋亡
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 中英文縮略表5-6
• 中文摘要6-9
• 英語摘要9-14
• 前言14-15
• 實驗材料15-20
• 實驗方法20-35
• 結(jié)果35-44
• 討論44-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻55-64
• 綜述64-84
• 參考文獻75-84
• 致謝84

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6 鄧R，

本文編號：964417