本文關鍵詞：IL-27對AA患者外周血中樹突狀細胞及單核細胞的影響

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【摘要】：背景:再生障礙性貧血為多種病因通過免疫途徑破壞骨髓造血干祖細胞引起的骨髓衰竭綜合征,常因造血干祖細胞缺陷、造血微環(huán)境異常、免疫異常而導致全血細胞減少,表現貧血、出血和感染而危及患者生命。AA患者中Th1、CTL細胞活化,Treg數量及功能下降,IFN-γ和TNF-α增高,而這種現象與IL-27產生的生物學作用相一致。目前研究表明AA患者骨髓上清中IL-27的水平與AA的嚴重程度密切相關,疾病越嚴重,IL-27的水平就越高。而AA患者抗原提呈細胞的數量及功能發(fā)生改變,這種改變是否由IL-27引起?這就引導我們探究IL-27對AA患者中免疫細胞,尤其是抗原提呈細胞對T細胞應答的影響。因此,本研究的目的是探究IL-27對AA患者抗原提呈細胞的影響,主要包括樹突狀細胞和單核細胞的增殖與凋亡、細胞因子分泌水平、細胞因子m RNA水平的影響,闡明IL-27在AA患者抗原提呈病理機制中的作用。目的:檢測IL-27對AA患者外周血中DC與單核細胞的影響。方法:(1)采用密度梯度離心法分離AA患者外周血中單個核細胞(PBMNCs),免疫磁珠分選DC與單核細胞并應用流式細胞儀檢測其純度;(2)利用CCK-8方法測定IL-27對AA患者DC與單核細胞增殖的影響;(3)Annexin V-PI法測定IL-27對DC與單核細胞凋亡的影響;(4)流式細胞術檢測IL-27對AA患者DC表面共刺激分子的影響;(5)ELISA法檢測IL-27對AA患者DC與單核細胞分泌的細胞因子IL-12、IL-23、IL-27的影響;(6)Real-time PCR方法測定IL-27對DC與單核細胞分泌的細胞因子IL-12、IL-23、IL-27 m RNA水平上的影響。結果:(1)IL-27能夠促進AA患者外周血中DC的增殖(without IL-27組OD值為0.3009±0.0091,with 50ng/ml IL-27組OD值為0.3354±0.0077,n=8,P=0.012);(2)IL-27能夠抑制AA患者外周血中DC的凋亡(without IL-27組凋亡率為51.750±2.454%,with 50ng/ml IL-27組凋亡率為41.750±2.235%,n=12,P=0.006);(3)IL-27可以上調AA患者外周血中DC表面共刺激分子CD80、CD86的表達;(4)IL-27可以促進AA患者外周血中DC分泌IL-12、IL-23、IL-27等細胞因子(without IL-27組IL-12、IL-23、IL-27分泌量分別是29.000±1.042 pg/ml、60.850±3.589 pg/ml、38.580±1.018 pg/ml,with 50ng/ml IL-27組IL-12、IL-23、IL-27分泌量分別是36.950±0.869 pg/ml、79.370±3.441 pg/ml、44.710±2.138 pg/ml,P值分別為0.000、0.005、0.003);(5)IL-27可以促進AA患者DC分泌的IL-12、IL-23、IL-27 m RNA表達(without IL-27組IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3 relative quantitive m RNA expression表達量為1.000±0.071、1.000±0.073、1.000±0.050、1.000±0.073、1.000±0.069、1.000±0.063,with 50ng/ml IL-27組IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3 relative quantitive m RNA expression表達量分別為1.695±0.193、1.585±0.254、2.285±0.404、1.585±0.254、4.158±0.320、1.647±0.224,P值分別是0.009、0.037、0.024、0.037、0.000、0.035);(6)不能證明IL-27促進AA患者外周血中單核細胞的增殖(without IL-27組OD值為0.2238±0.0102,with 50ng/ml IL-27組OD值為0.2435±0.0116,n=10,P=0.218);(7)IL-27能夠抑制AA患者外周血中單核細胞的凋亡(without IL-27組凋亡率為42.100±3.734%,with 50ng/ml IL-27組凋亡率為27.560±2.328%,n=9,P=0.002);(8)IL-27可以促進AA患者外周血中單核細胞分泌IL-12、IL-23、IL-27等細胞因子(without IL-27組IL-12、IL-23、IL-27分泌量分別是25.210±1.591pg/ml、35.540±1.728 pg/ml、26.690±1.133pg/ml,with 50ng/ml IL-27組IL-12、IL-23、IL-27分泌量分別是31.660±1.032 pg/ml、43.620±2.353pg/ml、37.440±1.640 pg/ml,P值分別為0.007、0.020、0.000);(9)IL-27可以促進AA患者單核細胞內IL-12、IL-23、IL-27 m RNA表達(without IL-27組IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3 relative quantitive m RNA expression表達量為1.000±0.082、1.000±0.075、1.000±0.067、1.000±0.075、1.000±0.061、1.000±0.069,with 50ng/ml IL-27組IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3 relative quantitive m RNA expression表達量分別為1.546±0.164、1.780±0.148、1.598±0.151、1.780±0.148、4.114±0.307、2.209±0.340,P值分別是0.046、0.001、0.004、0.001、0.000、0.009)。結論:IL-27可以促進AA患者外周血中DC的增殖,抑制其凋亡,上調DC表面的共刺激分子,刺激DC的IL-12、IL-23、IL-27 m RNA表達水平升高,促進DC分泌IL-12、IL-23、IL-27等細胞因子;IL-27可以抑制AA患者外周血中單核細胞的凋亡,刺激單核細胞的IL-12、IL-23、IL-27 m RNA表達水平升高,并促進單核細胞分泌IL-12、IL-23、IL-27等細胞因子,但不能證實IL-27可以促進單核細胞的增殖。
【關鍵詞】：IL-27 再生障礙性貧血 樹突狀細胞 單核細胞
【學位授予單位】：青海大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R556.5
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 主要符號對照表12-13
• 第1章 引言13-16
• 第2章 材料與方法16-27
• 2.1 材料16-19
• 2.1.1 研究對象16
• 2.1.2 主要試劑16-17
• 2.1.3 主要儀器17-19
• 2.2 方法19-26
• 2.2.1 技術路線19
• 2.2.2 PBMNCs的分離19-20
• 2.2.3 磁珠分選單核細胞20
• 2.2.4 DC的培養(yǎng)20
• 2.2.5 流式細胞術檢測DC的純度20-21
• 2.2.6 CCK-8 法檢測DC的增殖21
• 2.2.7 流式細胞術檢測DC的凋亡21-22
• 2.2.8 流式細胞術檢測IL-27對DC表面共刺激分子的影響22
• 2.2.9 RT-PCR方法檢測AA患者外周血中DC分泌的IL-12、IL-23、IL-27的mRNA水平22-25
• 2.2.9.1 DC總RNA提取22-23
• 2.2.9.2 逆轉錄制備cDNA23-24
• 2.2.9.3 cDNA的擴增24-25
• 2.2.10 ELISA法檢測AA患者外周血中DC分泌細胞因子IL-12、IL-23、IL-2725-26
• 2.2.11 流式細胞術檢測單核細胞的純度26
• 2.2.12 CCK-8 法檢測單核細胞的增殖26
• 2.2.13 流式細胞術檢測單核細胞的凋亡26
• 2.2.14 RT-PCR方法檢測AA患者外周血中單核細胞分泌的IL-12、IL-23、IL-27的mRNA水平26
• 2.2.15 ELISA法檢測AA患者外周血中單核細胞分泌的細胞因子IL-12、IL-23、IL-2726
• 2.3 統(tǒng)計學分析26-27
• 第3章 結果27-34
• 3.1 免疫磁珠分選AA患者外周血DC后的純度測定27
• 3.2 IL-27對AA患者外周血中DC增殖的影響27-28
• 3.3 IL-27對AA患者外周血中DC凋亡的影響28-29
• 3.4 IL-27對AA患者外周血中DC表面共刺激分子的影響29
• 3.5 IL-27對AA患者外周血中DC分泌細胞因子IL-12、IL-23、IL-27影響29-30
• 3.6 IL-27對AA患者外周血中DC分泌細胞因子IL-12、IL-23、IL-27 mRNA水平的影響30-31
• 3.7 IL-27對AA患者外周血中單核細胞增殖的影響31-32
• 3.8 IL-27對AA患者外周血中單核細胞凋亡的影響32
• 3.9 IL-27對AA患者外周血中單核細胞分泌細胞因子IL-12、IL-23、IL-27影響32-33
• 3.10 IL-27對AA患者外周血中單核細胞分泌細胞因子IL-12、IL-23、IL-27mRNA水平的影響33-34
• 第4章 討論34-38
• 第5章 結論38-39
• 參考文獻39-42
• 致謝42-44
• 綜述44-52
• 參考文獻50-52
• 作者簡介52

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

1 李俊紅;鄭以州;;獲得性再生障礙性貧血調節(jié)性T細胞缺陷研究進展[J];國際輸血及血液學雜志;2014年04期

2 蔣白麗;李建平;李文倩;馮建明;;CD8~+ T細胞及其分泌的細胞因子在再生障礙性貧血發(fā)病機制中的作用[J];中國實驗血液學雜志;2014年02期

3 劉麗華;潘曉明;單保恩;劉爽;桑梅香;劉月彩;胡曉東;;IL-27促進外周血單個核細胞來源樹突狀細胞分化成熟[J];細胞與分子免疫學雜志;2011年01期

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本文編號：960430