本文關(guān)鍵詞：載脂蛋白L1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:探討載脂蛋白L1(Apolipoprotein L1,Apo L1)轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。方法:1.將構(gòu)建好的Apo L1啟動(dòng)子重組載體通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染導(dǎo)入不同細(xì)胞株,48h后提取蛋白,雙熒光素酶報(bào)告基因法檢測(cè)Apo L1 5’端上游調(diào)控區(qū)在不同細(xì)胞株間的轉(zhuǎn)錄活性大小。2.利用染色質(zhì)免疫共沉淀方法(Ch IP)驗(yàn)證反式作用因子Sp1、IRF1、IRF2與Apo L1基因啟動(dòng)子-80nt~+265nt區(qū)域是否可特異性結(jié)合。3.將構(gòu)建好的重組載體質(zhì)粒p FLAG-Sp1、p FLAG-IRF1、p FLAG-IRF2轉(zhuǎn)染細(xì)胞,蛋白質(zhì)印跡法(western-blot)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)源性Sp1、IRF1、IRF2表達(dá)變化。4.將重組載體質(zhì)粒p FLAG-Sp1、p FLAG-IRF1、p FLAG-IRF2轉(zhuǎn)染細(xì)胞,利用實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real time RT-PCR)技術(shù)和western-blot檢測(cè)Sp1、IRF1、IRF2過(guò)表達(dá)對(duì)Apo L1表達(dá)的影響。5.將合成的Sp1-si RNA、IRF1-si RNA、IRF2-si RNA轉(zhuǎn)染導(dǎo)入細(xì)胞,western-blot驗(yàn)證Sp1、IRF1、IRF2沉默對(duì)細(xì)胞內(nèi)源性Sp1、IRF1、IRF2表達(dá)水平的影響。6.將合成的Sp1-si RNA、IRF1-si RNA、IRF2-si RNA轉(zhuǎn)染導(dǎo)入細(xì)胞,real time RT-PCR和western-blot驗(yàn)證Sp1、IRF1、IRF2沉默對(duì)Apo L1表達(dá)的影響。結(jié)果:1.構(gòu)建好的Apo L1啟動(dòng)子重組載體通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染導(dǎo)入細(xì)胞后,雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)luciferase熒光值。與對(duì)照組相比,Hu H7(肝癌細(xì)胞株)組luciferase熒光值增加500倍,293A(腎癌細(xì)胞株)組增加200倍,Hep G2(肝癌細(xì)胞株)組增加75倍,AGS(胃腺瘤細(xì)胞)組增加65倍,Bxpc3(胰腺癌細(xì)胞株)組增加25倍。2.在體內(nèi)反式作用因子Sp1、IRF1、IRF2和Apo L1啟動(dòng)子區(qū)上游-80nt~+265nt區(qū)域能夠特異性結(jié)合。3.Sp1、IRF1、IRF2基因過(guò)表達(dá)分別促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)源性Sp1、IRF1、IRF2蛋白水平表達(dá)。4.Sp1、IRF1、IRF2基因過(guò)表達(dá)促進(jìn)Apo L1轉(zhuǎn)錄及表達(dá)。5.Sp1、IRF1、IRF2基因沉默分別抑制細(xì)胞內(nèi)源性Sp1、IRF1、IRF2蛋白水平。6.Sp1、IRF1、IRF2基因沉默抑制Apo L1轉(zhuǎn)錄及表達(dá)。結(jié)論:1.Apo L1啟動(dòng)子活性在肝腎細(xì)胞中最高。2.明確了Sp1、IRF1、IRF2轉(zhuǎn)錄因子直接結(jié)合Apo L1的啟動(dòng)子,調(diào)控Apo L1的轉(zhuǎn)錄。
【關(guān)鍵詞】：載脂蛋白L1 轉(zhuǎn)錄調(diào)控 特異性蛋白1 干擾素調(diào)節(jié)因子1 干擾素調(diào)節(jié)因子2
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 附錄一 英文縮略詞表4-5
• 附錄二 試劑配方5-8
• 附錄三 主要儀器設(shè)備8-9
• 摘要9-11
• Abstract11-13
• 引言13-14
• 材料和方法14-26
• 結(jié)果26-33
• 討論33-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 致謝40-41
• 綜述41-48
• 綜述參考文獻(xiàn)46-48

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 徐安然;;孟魯司特聯(lián)合舒利迭對(duì)支氣管哮喘患兒血清Leptin、Eotaxin、ECP、LPO、細(xì)胞免疫及微量元素的影響[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年03期

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本文編號(hào)：948420