本文關(guān)鍵詞：鐵過(guò)載對(duì)骨髓造血微環(huán)境的影響及作用機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 鐵過(guò)載 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 骨髓造血微環(huán)境 活性氧物質(zhì) 可變鐵池

【摘要】：目的:探討小鼠鐵過(guò)載對(duì)骨髓造血微環(huán)境的影響及去鐵、抗氧化治療對(duì)其損傷的保護(hù)作用。內(nèi)容:通過(guò)建立小鼠鐵過(guò)載動(dòng)物模型,研究鐵過(guò)載對(duì)骨髓造血微環(huán)境的影響及可能機(jī)制,并探討地拉羅司去鐵及NAC抗氧化治療后,對(duì)該損傷作用的逆轉(zhuǎn)情況,為臨床治療繼發(fā)性鐵過(guò)載提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.通過(guò)4Gyγ射線全身照射和(或)右旋糖酐鐵腹腔注射建立正常和骨髓損傷情況下的鐵過(guò)載小鼠模型,通過(guò)①病理組織切片蘇木精-伊紅染色與普魯士藍(lán)染色的方法分析鐵過(guò)載小鼠肝臟、脾臟、骨髓的形態(tài)及鐵沉積情況;②流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)內(nèi)可變鐵池(LIP)水平驗(yàn)證鐵過(guò)載模型的成功建立。2.利用倍增時(shí)間及CCK8試劑盒檢測(cè)BM-MSCs的增殖能力;利用成骨及成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)BM-MSCs向成骨及成脂細(xì)胞分化;采用油紅-o、堿性磷酸酶(ALP)、茜素紅染色檢測(cè)BM-MSCs成骨及成脂定向分化能力;利用共培養(yǎng)的方法檢測(cè)BM-MSCs的造血支持能力;利用骨髓病理免疫組化檢測(cè)骨髓微環(huán)境造血因子的表達(dá)。3.采用2’,7’-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)探針?lè)z測(cè)鐵過(guò)載前后小鼠BM-MSCs活性氧(ROS)水平;利用Real-time RT-PCR方法檢測(cè)ROS相關(guān)基因FOXO3、PI3K水平的表達(dá);成骨相關(guān)基因RUNX2、ALP、OCN,成脂相關(guān)基因PPARg、Adipsin、a P2的表達(dá);檢測(cè)骨髓造血微環(huán)境造血因子VEGF、CXCL12、SCF的表達(dá)。4.經(jīng)地拉羅司(DFX)去鐵或經(jīng)N-乙酰半胱氨酸(NAC)抗氧化治療后,檢測(cè)上述指標(biāo)的變化。結(jié)果:1.小鼠肝臟、脾臟、骨髓內(nèi)可見(jiàn)大量鐵沉積,BM-MSCs內(nèi)LIP水平明顯升高,提示鐵過(guò)載模型成功建立;2.鐵過(guò)載抑制BM-MSCs的增殖能力,鐵劑組倍增時(shí)間(1.74±0.36天)長(zhǎng)于對(duì)照組(1.03±0.17天)(p0.05)。鐵過(guò)載影響B(tài)M-MSCs的成骨及成脂分化的平衡,鐵過(guò)載組成骨細(xì)胞ALP表達(dá)及茜素紅染色減弱,成脂細(xì)胞油紅-O染色增強(qiáng)。3.鐵過(guò)載抑制BM-MSCs的造血支持能力,在與骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BMMNCs)共培養(yǎng)1周后,其支持BMMNCs形成的造血細(xì)胞集落形成單位數(shù)(CFU-E,BFU-E,CFU-GM和CFU-mix)均明顯低于對(duì)照組(P0.05)。4.鐵過(guò)載抑制骨髓造血微環(huán)境造血因子VEGF、CXCL12、SCF的表達(dá),免疫組化及RT-PCR結(jié)果顯示與對(duì)照組比較,鐵劑組造血因子VEGF、CXCL12、SCF表達(dá)明顯減弱,經(jīng)去鐵或抗氧化處理后,上述改變部分恢復(fù)(P0.05)。5.加鐵組BM-MSCs內(nèi)ROS水平明顯高于對(duì)照組;且通過(guò)檢測(cè)ROS相關(guān)的信號(hào)通路發(fā)現(xiàn),加鐵組BM-MSCs的FOXO3表達(dá)減少、PI3K表達(dá)明顯升高(P0.05),當(dāng)給予DFX、NAC處理后,BM-MSC細(xì)胞內(nèi)ROS水平及其相關(guān)信號(hào)通路可被抑制(P0.05)。結(jié)論:1.通過(guò)腹腔注射右旋糖酐鐵能成功建立小鼠鐵過(guò)載模型。進(jìn)一步研究顯示鐵過(guò)載不但對(duì)肝臟、脾臟造成損害,而且可以損傷骨髓造血功能,尤其是骨髓造血微環(huán)境。2.4Gyγ射線照射造成小鼠骨髓損傷,在此基礎(chǔ)上發(fā)生鐵過(guò)載會(huì)加重?fù)p傷BM-MSCs功能。3.上述變化與BM-MSCs細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高有關(guān),清除細(xì)胞內(nèi)多余的鐵和ROS有利于維持BM-MSCs功能及造血微環(huán)境的功能。
【關(guān)鍵詞】：鐵過(guò)載 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 骨髓造血微環(huán)境 活性氧物質(zhì) 可變鐵池
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R55
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、鐵過(guò)載模型的建立及其對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響16-27
• 1.1 對(duì)象和方法16-20
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理20
• 1.2 結(jié)果20-25
• 1.2.1 鐵過(guò)載模型的鑒定20-21
• 1.2.2 BM-MSCs原代培養(yǎng)的形態(tài)21
• 1.2.3 BM-MSCs鐵過(guò)載鑒定21-22
• 1.2.4 鐵過(guò)載抑制BM-MSCs增殖22
• 1.2.5 鐵過(guò)載對(duì)BM-MSCs成脂的影響22-23
• 1.2.6 鐵過(guò)載抑制BM-MSCs向成骨細(xì)胞分化23-24
• 1.2.7 鐵過(guò)載抑制成骨相關(guān)基因表達(dá)24-25
• 1.2.8 鐵過(guò)載引起ROS升高25
• 1.3 討論25-26
• 1.4 小結(jié)26-27
• 二、鐵過(guò)載對(duì)骨髓造血微環(huán)境的損傷作用及機(jī)制研究27-43
• 2.1 材料和方法28-34
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法29-34
• 2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理34
• 2.2 結(jié)果34-40
• 2.2.1 小鼠鐵過(guò)載模型的鑒定34-35
• 2.2.2 BM-MSCs原代培養(yǎng)的形態(tài)35-36
• 2.2.3 鐵過(guò)載抑制BM-MSCs的增殖能力36
• 2.2.4 鐵過(guò)載抑制BM-MSCs向成骨細(xì)胞分化36-38
• 2.2.5 鐵過(guò)載促進(jìn)BM-MSCs向成脂細(xì)胞分化38
• 2.2.6 鐵過(guò)載抑制骨髓造血因子的表達(dá)38-39
• 2.2.7 鐵過(guò)載引起B(yǎng)M-MSCs的ROS升高及相關(guān)信號(hào)通路激活39-40
• 2.3 討論40-42
• 2.4 小結(jié)42-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明50-52
• 綜述52-63
• 綜述參考文獻(xiàn)58-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張先平;張貴海;陳斌;劉俊;魏強(qiáng);王璐;王亞平;;氧化低密度脂蛋白通過(guò)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)小鼠造血干細(xì)胞衰老[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年02期

，

本文編號(hào)：940863