發(fā)布時(shí)間：2017-09-26 23:01

  本文關(guān)鍵詞：miR-34a-5p經(jīng)c-Myc及STAG-2通路參與β射線對(duì)臍血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù)

  更多相關(guān)文章： 放射性核素 氚水 DNA損傷副作用 miR-34a-5p c-Myc STAG-2

【摘要】：背景:血管穩(wěn)態(tài)對(duì)人體健康至關(guān)重要,血管內(nèi)皮損傷導(dǎo)致血管穩(wěn)態(tài)破壞,將會(huì)導(dǎo)致包括冠心病在內(nèi)的多種疾病的發(fā)生。放射性核素可以產(chǎn)生β射線,廣泛用于腫瘤疾病的治療,但其伴隨的副作用不容忽視。我們推測(cè):β射線的副作用與其損傷血管內(nèi)皮,破壞了血管穩(wěn)態(tài)有關(guān),具體機(jī)制,國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。因此,建立氚水(HTO)內(nèi)照射模型來(lái)探討放射性核素所產(chǎn)生的β射線對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷及修復(fù)機(jī)制。方法:將HTO加入臍血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)培養(yǎng)基中,連續(xù)培養(yǎng)三天,期間每天用CCK8比色測(cè)定法及臺(tái)盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)法來(lái)測(cè)定HTO組以及對(duì)照組細(xì)胞的增殖能力以及細(xì)胞活力。12小時(shí)內(nèi)分別抽取6個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn),用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)HTO組HUVEC細(xì)胞中mi R-34a-5p表達(dá)水平。在四個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn),分別對(duì)對(duì)照組和HTO組的細(xì)胞使用彗星分析法和γ-H2AX免疫熒光染色法來(lái)測(cè)量DNA單鏈斷裂和DNA雙鏈斷裂情況。通過(guò)脂質(zhì)體2000將mi R-34a-5p類似物(mi R-34a-5p mimics),mi R-34a-5p抑制物(mi R-34a-5p inhibitor)以及它們的對(duì)照組分別轉(zhuǎn)染進(jìn)入HUVEC細(xì)胞中。將這四組細(xì)胞都暴露于HTO環(huán)境下,連續(xù)培養(yǎng)三天,用同樣的方法來(lái)測(cè)定每天各組細(xì)胞的增殖能力以及細(xì)胞活力。用同樣的方法測(cè)定四個(gè)時(shí)間點(diǎn)(0h,0.5h,2h,4h)上各組細(xì)胞的DNA單鏈斷裂和DNA雙鏈斷裂的情況。最后,我們用RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法來(lái)測(cè)定上述六組HUVEC細(xì)胞中c-Myc以及STAG-2基因在0.5h,2h的表達(dá)情況。結(jié)果:與對(duì)照組相比,HTO組HUVEC細(xì)胞增殖能力及細(xì)胞活力在連續(xù)3天測(cè)定中均明顯低于對(duì)照組。HTO組細(xì)胞中mi R-34a-5p的表達(dá)發(fā)生明顯動(dòng)態(tài)變化,根據(jù)mi R-34a-5p表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化,我們選擇mi R-34a-5p表達(dá)最高點(diǎn)、最低點(diǎn)以及急性期的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)來(lái)進(jìn)行研究,分別是0h,0.5h,2h以及4h。除了0h以外,其余三個(gè)時(shí)間點(diǎn),HTO組HUVEC細(xì)胞DNA單鏈以及雙鏈的損傷相對(duì)于對(duì)照均明顯增高,且趨勢(shì)一致。同樣的,在0.5h、2h、4h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上,mi R-34a-5p mimics組HUVEC細(xì)胞DNA單鏈以及雙鏈的損傷均高于mi R-34a-5p inhibitor組,相反其細(xì)胞增殖能力以及細(xì)胞活力均明顯低于mi R-34a-5p inhibitor組。我們觀察到mi R-34a-5p mimics組中c-Myc以及STAG-2基因的表達(dá)在0.5h、2h均低于mi R-34a-5p inhibitor組。結(jié)論:mi R-34a-5p能夠調(diào)節(jié)基因c-Myc以及STAG-2的表達(dá)來(lái)參與HTO引起HUVEC細(xì)胞損傷及修復(fù)過(guò)程。本研究從分子水平證實(shí)了β射線對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷機(jī)制,并為防治放射性核素臨床毒副作用提供了嶄新的視角。
【關(guān)鍵詞】：放射性核素 氚水 DNA損傷副作用 miR-34a-5p c-Myc STAG-2
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 第一部分 氚水產(chǎn)生的β射線抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞DNA損傷并引起miR-34a-5p在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)發(fā)生動(dòng)態(tài)變化11-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料11-13
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法13-17
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-21
• 1.4 討論21-22
• 第二部分miR-34a-5p調(diào)節(jié)下游c-Myc及STAG-2基因的表達(dá)參與β射線引起HUVEC細(xì)胞的損傷修復(fù)過(guò)程22-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料22-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-30
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-36
• 2.4 討論36-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 綜述45-53
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 中英文對(duì)照縮略語(yǔ)詞表53-55
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文55-56
• 致謝56-57

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