本文關(guān)鍵詞：花生四烯酸對巨噬細(xì)胞脂質(zhì)積累和細(xì)胞周期影響的研究

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【摘要】：花生四烯酸(arachidonic acid,AA)是體內(nèi)分布最為廣泛的多不飽和脂肪酸之一,主要以磷脂的形式存在于細(xì)胞膜上,對于維持細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能有著重要的作用。在生理或病理條件下,AA受到多種磷脂酶的作用,從細(xì)胞膜上游離出來,參與機體代謝。AA及其代謝產(chǎn)物構(gòu)成了機體的主要炎癥網(wǎng)絡(luò),參與機體的多種炎癥反應(yīng),包括類風(fēng)濕性疾病和動脈粥樣硬化等慢性炎癥性疾病。動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是一類慢性炎癥性心血管疾病,由脂質(zhì)過載的巨噬細(xì)胞在受損動脈管壁內(nèi)膜下積累所引發(fā)的不良免疫應(yīng)答所引起。巨噬細(xì)胞作為體內(nèi)一類重要的免疫細(xì)胞,參與了AS斑塊形成、穩(wěn)定及破裂的整個過程。巨噬細(xì)胞的脂質(zhì)代謝紊亂所導(dǎo)致的泡沫細(xì)胞形成被視為是AS病情惡化的第一步。細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累與活性氧(ROS)水平關(guān)系密切,大量的脂質(zhì)積累可導(dǎo)致胞內(nèi)ROS含量升高。細(xì)胞內(nèi)過量的ROS會對線粒體造成損傷從而影響其ATP的產(chǎn)生,而ATP可以通過與ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)結(jié)合,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇外流,加速細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)代謝。細(xì)胞內(nèi)ROS升高會激活JNK信號通路誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯或凋亡。有研究顯示JNK信號通路可通過調(diào)節(jié)Fox O蛋白來影響細(xì)胞周期。Fox O蛋白是一類很重要的蛋白家族,它的功能涉及細(xì)胞周期,DNA損傷修復(fù),細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激等。AA及其代謝產(chǎn)物對AS的作用目前已研究較多,但是其對AS發(fā)展過程中巨噬細(xì)胞的作用及相關(guān)機制尚不清楚。本研究檢測了AA對raw264.7巨噬細(xì)胞脂質(zhì)積累及增殖凋亡等的影響,為進(jìn)一步探討AA對動脈粥樣硬化中巨噬細(xì)胞的作用提供理論依據(jù)。結(jié)果顯示:1)AA濃度梯度(0、40、60、80μM)處理血液單核細(xì)胞和raw264.7細(xì)胞系后,細(xì)胞活性受到明顯的抑制,且具有濃度依賴性,而時間梯度處理結(jié)果顯示48h組的細(xì)胞活性高于24h組。細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平和脂滴的積累隨著AA濃度的升高而顯著增加,同時出現(xiàn)泡沫化趨勢。細(xì)胞內(nèi)ROS水平增高且ATP水平顯著下降。2)AA濃度梯度處理raw264.7后,處于S期的細(xì)胞增多,且80μM處理組幾乎沒有檢測到G2/M期的細(xì)胞。western blot結(jié)果顯示,cyclin D和CDK4蛋白的表達(dá)受到抑制,p53和p27蛋白的表達(dá)升高,但caspase3蛋白的表達(dá)沒有變化。3)AA濃度梯度處理raw264.7后,JNK蛋白和Fox O蛋白表達(dá)升高。JNK被抑制后AA對cyclin D、CDK4、p53和p27的下調(diào)或上調(diào)作用受到阻礙,同時也下調(diào)了Fox O蛋白表達(dá)。以上結(jié)果表明,AA能夠阻礙raw264.7細(xì)胞的脂質(zhì)代謝,抑制raw264.7的細(xì)胞周期但未誘導(dǎo)其凋亡,并且通過JNK信號通路影響raw264.7細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：花生四烯酸 巨噬細(xì)胞 細(xì)胞周期 脂質(zhì)積累 JNK
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮寫詞表10-12
• 引言12-14
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述14-24
• 第1章 花生四烯酸及其生物學(xué)作用14-18
• 1 花生四烯酸14-15
• 2 花生四烯酸代謝網(wǎng)絡(luò)及其生理作用15-18
• 2.1 COX途徑16-17
• 2.2 LOX途徑17
• 2.3 CYP450途徑17-18
• 第2章 巨噬細(xì)胞與動脈粥樣硬化18-24
• 1 巨噬細(xì)胞18-19
• 2 巨噬細(xì)胞的極化及生理作用19-20
• 2.1 M1型巨噬細(xì)胞19-20
• 2.2 M2型巨噬細(xì)胞20
• 3 動脈粥樣硬化20-21
• 4 巨噬細(xì)胞在動脈粥樣硬化中的作用21-24
• 第二篇 研究內(nèi)容24-47
• 第1章 花生四烯酸對巨噬細(xì)胞活性及脂質(zhì)積累的影響24-36
• 1 材料與方法24-29
• 1.1 材料24-26
• 1.2 方法26-29
• 2 結(jié)果29-33
• 2.1 AA對巨噬細(xì)胞細(xì)胞活性及增殖的影響29-30
• 2.2 AA對raw264.7 細(xì)胞內(nèi)甘油三酯（TG）水平的影響30-31
• 2.3 AA對raw264.7 細(xì)胞脂質(zhì)積累影響31-32
• 2.4 AA對raw264.7 細(xì)胞ROS和ATP水平的影響32-33
• 3 討論33-34
• 4 小結(jié)34-36
• 第2章 花生四烯酸對巨噬細(xì)胞細(xì)胞周期的影響36-47
• 1 材料與方法36-40
• 1.1 材料36-37
• 1.2 方法37-40
• 2 結(jié)果40-44
• 2.1 AA對raw264.7 細(xì)胞凋亡蛋白caspase3的影響40
• 2.2 AA處理后raw264.7 細(xì)胞周期的變化40-41
• 2.3 AA對raw264.7 細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響41-42
• 2.4 JNK在AA抑制raw264.7 細(xì)胞周期中的作用42-43
• 2.5 AA對raw264.7 細(xì)胞FoxO蛋白的影響43-44
• 3 討論44-46
• 4 小結(jié)46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-58
• 導(dǎo)師簡介58-59
• 作者簡介59-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：912476