本文關鍵詞：溶酶體酸性alpha-葡糖苷酶在冠心病發(fā)病中的作用探討

  更多相關文章： 冠心病 心肌梗死 自噬 溶酶體 酸性α-葡糖苷酶

【摘要】：研究背景：冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(Coronary artery disease,CAD)是一種由遺傳因素和環(huán)境因素互相作用導致的常見的復雜性疾病,是目前人群死亡的主要原因之一,但目前引起其發(fā)生的遺傳原因尚不明確。自噬是一個利用細胞內(nèi)的溶酶體分解蛋白質(zhì)及自身細胞器并將其產(chǎn)生的部分物質(zhì)予以回收利用的高度保守的細胞降解過程。近年來研究認為自噬參與脂質(zhì)代謝過程及炎癥反應等從而影響冠心病的發(fā)生、發(fā)展。研究已經(jīng)表明,在冠心病患者中自噬基因的表達有所改變,發(fā)生了自噬功能失調(diào)。目的：研究溶酶體酸性水解酶α-葡萄糖苷酶(GAA)基因在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者和健康對照組中的表達水平,探討溶酶體酸性水解酶在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的發(fā)生、發(fā)展方面的作用及其機制,為冠心病的診療和研究提供新的理論依據(jù)。方法：采集248例冠心病患者和208例健康對照(年齡、性別相匹配)的外周空腹靜脈血,并分離外周血白細胞和血漿。采用高敏感性熒光原底物法測定α葡糖苷酶的活性,以不同濃度梯度的4-甲基傘酮純品制作標準曲線,使用Turner Biosystems TBS-380微型熒光計測定熒光強度,使用SPSS統(tǒng)計軟件線性回歸產(chǎn)生的方程式計算酶活性。采用RT-PCR方法分析GAA的相對轉錄水平：使用總RNA提取試劑TRIzol reagent提取白細胞總RNA,使用逆轉錄試劑盒逆轉錄合成cDNA,然后PCR擴增GAA基因(30循環(huán))和β- actin基因(25循環(huán))片段。實驗結束后,PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳并成像。用灰度掃描定量,GAA的信號強度用β- actin標準化。所有的實驗均重復三次,取結果的平均值進行分析。采用Western blot的方法檢測GAA的蛋白水平：用細胞裂解液裂解白細胞提取蛋白質(zhì),用核酸蛋白測定儀測定所得蛋白溶液的濃度。取30μg蛋白使用蛋白分離膠進行SDS-PAGE,然后將之轉印到硝酸纖維素膜；然后硝酸纖維素膜與GAA抗體或β- actin抗體孵育,然后再與HRP標記的第二抗體孵育,最后用化學發(fā)光試劑盒進行顯像成像。所有的實驗均重復三次,取結果的平均值進行分析。蛋白的信號數(shù)據(jù)分析方法同RT-PCR實驗。最后從GAA的酶學活性、蛋白質(zhì)翻譯水平和基因轉錄水平上來分析GAA基因表達情況,并結合患者的臨床化驗指標,在冠心病患者組和健康對照組之間進行其表達差異的比較。結果：GAA的酶活性在冠心病組較對照組顯著升高,其差別有統(tǒng)計學意義(P0.05),但在冠心病不同的類型之間(穩(wěn)定性心絞痛、不穩(wěn)定性心絞痛和心肌梗塞)沒有明顯的差別。在轉錄水平上,冠心病組的GAA的轉錄水平較對照組顯著升高(P0.01),但是在冠心病各個分組中其差別無統(tǒng)計學意義(P0.05)。其結果與GAA酶活性的變化相一致。多因素Logistic回歸分析顯示,GAA基因的轉錄水平與冠心病的發(fā)病密切相關(OR 5.93,95% CI 2.98-11.78, P= 3.89×10-7)。GAA的蛋白質(zhì)翻譯水平采用Western blot方法進行了檢測。CAD病人的GAA蛋白水平較對照升高(圖3A,3B),但是其差別無統(tǒng)計學意義(P0.05)。而且,在冠心病的三個類型之間也沒用明顯的差別,這可能是與Western blot敏感性有關。結論：與正常對照組相比,GAA基因的表達水平在冠心病患者外周血白細胞中發(fā)生了改變。多因素Logistic回歸分析顯示GAA表達水平的改變與冠心病之間存在著密切的聯(lián)系。我們的研究結果表明,GAA基因可能在冠心病的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用。
【關鍵詞】：冠心病 心肌梗死 自噬 溶酶體 酸性α-葡糖苷酶
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R541.4
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-13
• 1 材料與方法13-31
• 2 實驗結果31-35
• 3 討論35-38
• 4 小結38-39
• 參考文獻39-43
• 綜述43-53
• 參考文獻50-53
• 附錄53-54
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況54-55
• 致謝55-56
• 個人簡歷56

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ＶｉｖｉａｎＣｈａｎ,ＴＫＣｈａｎ,ＤａｖｉｄＴｏｄｄ;Alpha and beta thalassemias in Hong Kong[J];Chinese Medical Journal;1997年06期

2 王興旺,胥彬;INFLUENCE OF ALPHA-FETOPROTEIN ON THE GROWTH OF TUMOR CELLS IN VITRO[J];Chinese Journal of Cancer Research;1997年02期

3 張繼增;CARCINOHISTOGENESIS AND EXPRESSION OF ALPHA FETOPROTEIN IN EXPERIMENTAL HEPATOCARCINOMA[J];Chinese Journal of Cancer Research;1999年02期

4 詹鶴琴;袁毅;秦蓉;;t(6;11)染色體易位腎細胞癌中Alpha基因片段的克隆及啟動子活性分析[J];中國腫瘤臨床;2014年15期

5 ;Determination of Alpha-mangostin in Pericarpium Garciniae mangostanae by RP-HPLC-UVD[J];Medicinal Plant;2010年03期

6 肖文雅;王涵;王永波;;談如何在Photoshop中用Alpha通道摳圖[J];中國醫(yī)學教育技術;2010年03期

7 夏仁康;;談Alpha通道及其應用[J];中國醫(yī)學教育技術;2005年06期

8 孟惠娟,張振民,高育葵;腦電圖ALPHA波百分指數(shù)動態(tài)變化探討[J];首都醫(yī)藥;2000年05期

9 李青,王文亮,劉彥仿;IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDY OF ALPHA-1-ANTICHYMOTRYPSIN IN GLIOMA[J];Chinese Journal of Cancer Research;1989年03期

10 李春勝;王宏;;腦電Alpha波的混沌關聯(lián)維數(shù)分析[J];儀器儀表學報;2009年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 ;Differential Expression of Folate Receptor Alpha in Pituitary Adenomas and Its Relationship to Tumor Behavior[A];2011中華醫(yī)學會神經(jīng)外科學學術會議論文匯編[C];2011年

2 ;Effect of Glycation on Alpha-Synuclein[A];第九屆全國酶學學術討論會暨鄒承魯誕辰85周年紀念會論文摘要集[C];2008年

3 程攻;呂偉國;儲昭坦;盧炳武;侯健;;Alpha艙的模型設計及其擴散體的優(yōu)化[A];泛在信息社會中的聲學——中國聲學學會2010年全國會員代表大會暨學術會議論文集[C];2010年

4 W.P．Daniel Su;;Alpha-1 Antitrypsin Panniculitis:What’s New?[A];中華醫(yī)學會第十二次全國皮膚性病學術會議論文集[C];2006年

5 唐世浩;;基于訂正ALPHA差值譜的MODIS溫度/發(fā)射率分離算法[A];全國優(yōu)秀青年氣象科技工作者學術研討會論文集[C];2006年

6 信會菊;郝維昌;王天民;;S摻雜alpha-氧化鉍的光催化性能研究[A];2011中國材料研討會論文摘要集[C];2011年

7 倪冬冬;任中洲;;形變核alpha衰變半衰期和精細結構的理論研究[A];第十四屆全國核物理大會暨第十屆會員代表大會論文集[C];2010年

8 張洪梅;林寧;董艷;蘇青;;蛋白激酶C alpha在甲減性鼠腦發(fā)育障礙中的作用[A];中華醫(yī)學會第十一次全國內(nèi)分泌學學術會議論文匯編[C];2012年

9 酈志軍;尹小妹;;深低溫體外循環(huán)中alpha穩(wěn)態(tài)和pH穩(wěn)態(tài)血氣管理對腦組織氧代謝的影響[A];2004年浙江省胸心外科學術年會論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 金力;別了，，Alpha[N];中國電腦教育報;2004年

2 凡妮;慧層欲“拯救”Alpha客戶投資[N];電腦商報;2008年

3 本報記者 周蕾;關于Alpha的思考[N];網(wǎng)絡世界;2002年

4 本報記者 武漢;Alpha拒絕“末代絕唱”[N];網(wǎng)絡世界;2004年

5 本報記者 劉學習;Alpha仍在前進[N];計算機世界;2003年

6 ;40萬Alpha用戶是誰的盤中餐？[N];計算機世界;2003年

7 本報記者 何進偉;Alpha未來會更好[N];網(wǎng)絡世界;2002年

8 Li Hua;巧用Alpha通道實現(xiàn)特效[N];電腦報;2004年

9 核工業(yè)計算機技術應用所 研究員 王德安$$中國惠普公司企業(yè)策劃部 高級技術顧問 張報昌;攀登Alpha新高峰[N];計算機世界;2003年

10 本報記者 劉學習;Alpha鋪就前方路[N];計算機世界;2004年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 李旭濤;Alpha穩(wěn)定分布模型及其應用研究[D];華中科技大學;2006年

2 張冰怡;分數(shù)Alpha通信量模型的研究與應用[D];南京理工大學;2004年

3 范乃軍;食管鱗癌免疫組化標志物TP-Alpha，Collagen Alpha-1（Ⅵ）Chain和S100A9的鑒定[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

4 劉濤;蛋白激酶C alpha抑制劑逆轉腎癌多藥耐藥的研究[D];中國醫(yī)科大學;2007年

5 張曉玲;關于愛因斯坦（alpha，beta）度量及其相關問題[D];浙江大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 錢明鳳;基于Alpha值預測的投資模型研究[D];華南理工大學;2015年

2 張靜毅;溶酶體酸性alpha-葡糖苷酶在冠心病發(fā)病中的作用探討[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

3 章宏帆;運用量化投資策略實現(xiàn)超額收益Alpha的理論與實踐[D];浙江大學;2015年

4 陳景祥;金黃色葡萄球菌生物膜形成及其alpha-毒素表達分析的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2007年

5 王國一;基于Alpha波的腦—機接口技術研究[D];東北大學;2009年

6 孫凱;國內(nèi)證券市場Alpha套利策略實證研究[D];對外經(jīng)濟貿(mào)易大學;2014年

7 程攻;Alpha艙設計仿真與通過噪聲測試標準輔助軟件的開發(fā)[D];吉林大學;2010年

8 師寧寧;基于Alpha穩(wěn)定分布參數(shù)的齒輪故障建模及檢測[D];哈爾濱工業(yè)大學;2013年

9 呂曉蕊;Alpha穩(wěn)定分布的模型仿真及參數(shù)估計[D];華中科技大學;2008年

10 馬洪帥;Alpha穩(wěn)定分布噪聲下數(shù)字信號的參數(shù)估計及調(diào)制識別[D];西安電子科技大學;2014年

本文編號：880369