本文關(guān)鍵詞：FAKsiRNA通過下調(diào)mTERF1、CyclinD1抑制低氧誘導(dǎo)下人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 低氧 黏著斑激酶 線粒體轉(zhuǎn)錄終止1 細(xì)胞周期蛋白1 肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

【摘要】：目的:討論低氧誘導(dǎo)下,FAK能否由m TERF1、Cyclin D1信號(hào)通路抑制人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖。方法:將人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行原代,利用人工設(shè)計(jì)、化學(xué)合成的人FAK、m TERF1的si RNA脂質(zhì)體經(jīng)Lipofectamine2000將轉(zhuǎn)入人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中。將細(xì)胞分為常氧(37℃,5%CO2,21%O2)NCsi RNA組、FAKsi RNA組、m TERF1si RNA組,低氧(37℃、5%CO2、5%O2、90%N2)NCsi RNA組、FAKsi RNA組、m TERF1si RNA組。用Realtime-PCR檢測細(xì)胞內(nèi)FAKm RNA、m TERF1m RNA、Cyclin D1m RNA的水平,Western Blot和FAK、Cyclin D1、m TERF1蛋白質(zhì)的表達(dá),免疫熒光檢測FAK、Cyclin D1蛋白的表達(dá),CCK8法測定細(xì)胞增殖能力。結(jié)果:與常氧NCsi RNA組比較,常氧FAKsi RNA組FAKm RNA及蛋白質(zhì)表達(dá)明顯減少(P0.05),而m TERF1、Cyclin D1m RNA及蛋白表達(dá)無明顯差異(P0.05);與低氧NCsi RNA組比較,低氧FAKsi RNA組FAKm RNA及蛋白質(zhì)表達(dá)明顯減少(P0.05),而m TERF1 m RNA和m TERF1蛋白質(zhì)、Cyclin D1m RNA和Cyclin D1蛋白質(zhì)表達(dá)均減少(P0.05);與常氧NCsi RNA組比較,轉(zhuǎn)染m TERF1si RNA后,常氧m TERF1si RNA組m TERF1m RNA及蛋白質(zhì)表達(dá)明顯減少(P0.05),而FAK、Cyclin D1m RNA及蛋白質(zhì)表達(dá)無明顯變化(P0.05)。與低氧NCsi RNA組比較,轉(zhuǎn)染m TERF1si RNA后,低氧m TERF1si RNA組m TERF1m RNA及蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05),低氧下CCND1m RNA和CCND1蛋白表達(dá)減少(P0.05),而FAKm RNA及FAK蛋白質(zhì)表達(dá)改變不明顯(P0.05)。免疫熒光檢測顯示常氧FAKsi RNA組與常氧NCsi RNA組相比較,FAK是si RNA熒光表達(dá)下降明顯(P0.05),Cyclin D1的熒光表達(dá)變化不明顯(P0.05)。低氧下,FAKsi RNA組較NCsi RNA組相比,其FAK熒光表達(dá)明顯下降(P0.05),Cyclin D1的熒光表達(dá)也隨之降低(P0.05)。結(jié)論:低氧誘導(dǎo)下,沉默F(xiàn)AK可致人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞m TERF1、Cyclin D1表達(dá)減少,且抑制HPASMCs增殖,而沉默m TERF1后Cyclin D1表達(dá)減少,FAK表達(dá)無明顯改變。提示FAK是通過m TERF1/cyclin D1通路信號(hào)參與低氧狀態(tài)下人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：低氧 黏著斑激酶 線粒體轉(zhuǎn)錄終止1 細(xì)胞周期蛋白1 肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R544.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要中英文對(duì)照9-10
• 主要儀器及試劑10-16
• 前言16-18
• 第1章 原代細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定18-22
• 1.1 培養(yǎng)原代HPASMCs18-19
• 1.1.1 組織取材18
• 1.1.1.1 取材對(duì)象18
• 1.1.1.2 取材地點(diǎn)18
• 1.1.1.3 取材步驟及內(nèi)容18
• 1.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)18-19
• 1.1.2.1 肺動(dòng)脈分離18
• 1.1.2.2 分離肺動(dòng)脈平滑肌18
• 1.1.2.3 組織貼片法18-19
• 1.1.2.4 細(xì)胞傳代19
• 1.2 人肺動(dòng)脈平滑細(xì)胞的鑒定19-22
• 1.2.1 倒置顯微鏡下形態(tài)鑒定20
• 1.2.2 α-actin免疫組化法鑒定20
• 1.2.3 鈣調(diào)節(jié)蛋白-1 免疫熒光法鑒定20-22
• 第2章 實(shí)驗(yàn)方法22-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)分組22
• 2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染22-24
• 2.2.1 小干擾設(shè)計(jì)及序列號(hào)22-23
• 2.2.2 轉(zhuǎn)染方法及過程23-24
• 2.3 Realtime PCR24-27
• 2.3.1 引物設(shè)計(jì)及序列號(hào)24
• 2.3.2 細(xì)胞RNA的提取24-25
• 2.3.3 紫外線吸光法鑒定細(xì)胞RNA純度及濃度25-26
• 2.3.4 逆轉(zhuǎn)錄及cDNA合成26
• 2.3.5 PCR擴(kuò)增26-27
• 2.4 Western-blot27-31
• 2.4.1 細(xì)胞總蛋白提取27-28
• 2.4.2 BCA法測定蛋白濃度28
• 2.4.3 SDS-PAGE電泳28-29
• 2.4.4 轉(zhuǎn)膜29-30
• 2.4.5 免疫反應(yīng)30
• 2.4.6 蛋白信號(hào)曝光，顯影，定影30-31
• 2.4.7 凝膠圖像分析31
• 2.5 免疫熒光31-32
• 2.6 細(xì)胞增殖檢測（CCK8法）32-34
• 第3章 統(tǒng)計(jì)分析34-36
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-44
• 4.1 RT-PCR檢測FAK、mTERF1、CyclinD1mRNA的表達(dá)36-37
• 4.2 Western-Blot檢測FAK、m TERF1、CyclinD1蛋白表達(dá)37-39
• 4.3 免疫熒光檢測FAK、CyclinD1蛋白表達(dá)39-42
• 4.4 CCK8檢測人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖42-44
• 第5章 討論44-48
• 第6章 結(jié)論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 附錄54-56
• 綜述 FAK在COPD呼吸道平滑肌細(xì)胞增殖中作用機(jī)制的研究進(jìn)展56-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 致謝68-69

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊慧;FAKsiRNA通過下調(diào)mTERF1、CyclinD1抑制低氧誘導(dǎo)下人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖機(jī)制的研究[D];南華大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：879701