本文關(guān)鍵詞：欖香烯抗再狹窄的機(jī)理研究及其緩釋涂層的檢測

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【摘要】：經(jīng)皮冠狀動脈介入治療是現(xiàn)在治療冠狀動脈粥樣硬化性心血管疾病的主要方法之一,但其術(shù)后3-6個月內(nèi)高達(dá)30%~50%的再狹窄發(fā)生率,使再狹窄的機(jī)理和防治研究成為該領(lǐng)域的焦點。近年,廣泛使用的雷帕霉素和紫杉醇藥物洗脫支架已經(jīng)使再狹窄率降低至10%以下,可是仍存在內(nèi)皮化延遲、晚期血栓等副作用,所以研發(fā)新型、毒副作用小、經(jīng)濟(jì)、高效的支架涂層藥物尤為重要。再狹窄是多種因素綜合作用的結(jié)果,包括血管內(nèi)膜損傷,血管平滑肌細(xì)胞遷移及增殖,血栓形成,血管重塑等一系列病理過程,其中,血管平滑肌細(xì)胞過度增殖、遷移分泌大量的胞外基質(zhì)等異常的生物學(xué)表現(xiàn)是導(dǎo)致再狹窄發(fā)生的主要原因。欖香烯是中國自主研發(fā)的非細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物,提取自中草藥姜科植物溫郁金,具有高效廣譜抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。前期研究顯示欖香烯可以抑制平滑肌細(xì)胞遷移和增殖,同時又能抑制血小板的聚集,擴(kuò)張血管,改善血循環(huán),具有應(yīng)用于心血管系統(tǒng),防治再狹窄的前景。脂質(zhì)體具有長期緩釋、主動靶向、高效持續(xù)治療等優(yōu)點,所以制備欖香烯脂質(zhì)體有可能成為新型、高效的抗再狹窄支架涂層藥物。本文主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:①欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的影響。分離和培養(yǎng)大鼠主動脈原代血管平滑肌細(xì)胞;通過細(xì)胞計數(shù)法研究欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響;劃痕法和小室法研究欖香烯對細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果顯示,當(dāng)欖香烯濃度超過12.5μg/ml時,顯著抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移(P0.05),且作用具有劑量-時間依賴性。隨著欖香烯濃度的增加,處理原代血管平滑肌細(xì)胞后,細(xì)胞鋪展面積減小、胞間連接被打斷、核質(zhì)皺縮,形態(tài)狹長。②欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的機(jī)理研究。流式細(xì)胞術(shù)檢測欖香烯對細(xì)胞周期和凋亡的影響;免疫熒光檢測欖香烯對細(xì)胞骨架F-actin和胞內(nèi)Ca2+的影響;采用FX-4000T細(xì)胞張應(yīng)變加載系統(tǒng),對血管平滑肌細(xì)胞施加5%牽張幅度的周期性張應(yīng)變,加載頻率為1.0Hz,時間為12h,Inc RNA芯片分析欖香烯對平滑肌細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá),WB檢測加載前后PCNA、P53、Cx43蛋白的量。結(jié)果顯示,欖香烯能夠阻滯細(xì)胞于S/G2期,并能促進(jìn)細(xì)胞凋亡,且作用具有劑量-時間依賴性。25μg/ml的欖香烯作用血管平滑肌細(xì)胞與對照組比較,細(xì)胞排列紊亂、稀疏,形態(tài)狹長,且細(xì)胞骨架的肌絲變粗、熒光增強(qiáng)。25μg/ml的欖香烯作用血管平滑肌細(xì)胞后,平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度先明顯升高1倍再恢復(fù)到正常水平。力學(xué)加載后,與對照組比較,欖香烯處理組血管平滑肌細(xì)胞的基因表達(dá)譜中相對無藥物處理組有1417個基因表達(dá)差異在2倍以上,涉及PPAR、MAPK、Akt、Erk1/2等約34個信號通路,其中P53的表達(dá)增加,PCNA和Cx43的表達(dá)下降。③欖香烯脂質(zhì)體緩釋涂層的制備及其對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響。用乙醇注入法制備欖香烯脂質(zhì)體;靜電電噴制備欖香烯脂質(zhì)體涂層;液相色譜檢測欖香烯脂質(zhì)體涂層的緩釋效果;藥物緩釋涂層與血管平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng),分析對其增殖和周期的影響。實驗制備的欖香烯脂質(zhì)體大小均勻,呈卵圓形。結(jié)果表明,在1h、36h、7d、28d時,欖香烯脂質(zhì)體電噴涂層和欖香烯注射液涂層比較,具有顯著的緩釋效果(P0.05)。10μg/mm2、15μg/mm2的欖香烯藥物電噴膜與對照組相比較,對VSMC的增殖有明顯的抑制作用(P0.05),且阻滯細(xì)胞分裂周期于S期和G2期。綜上,欖香烯可以抑制平滑肌細(xì)胞的增殖、遷移,阻滯周期,促進(jìn)凋亡,其作用涉及多種蛋白因子及信號通路。欖香烯脂質(zhì)體具有緩釋效果和抑制平滑肌細(xì)胞增殖的作用。本研究為欖香烯作為支架涂層藥物在經(jīng)皮冠脈介入治療領(lǐng)域的應(yīng)用提供了一定的實驗依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：欖香烯 血管平滑肌細(xì)胞 增殖 脂質(zhì)體
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-7
• 主要縮略詞表7-11
• 1 緒論11-20
• 1.1 問題的提出及研究的意義11-12
• 1.1.1 問題的提出11-12
• 1.1.2 研究的意義12
• 1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀12-17
• 1.2.1 再狹窄機(jī)制的研究現(xiàn)狀12-14
• 1.2.2 抗再狹窄藥物的研究現(xiàn)狀14-15
• 1.2.3 欖香烯藥物的藥理研究和應(yīng)用研究現(xiàn)狀15-16
• 1.2.4 脂質(zhì)體的研究現(xiàn)狀及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用16-17
• 1.3 研究的目的、內(nèi)容及技術(shù)路線17-20
• 1.3.1 研究目的17-18
• 1.3.2 研究內(nèi)容18
• 1.3.3 創(chuàng)新點18-19
• 1.3.4 技術(shù)路線19-20
• 2 欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的影響20-32
• 2.1 引言20
• 2.2 材料、試劑與儀器20-21
• 2.2.1 實驗材料20
• 2.2.2 實驗試劑20-21
• 2.2.3 實驗儀器21
• 2.3 實驗方案21-23
• 2.3.1 SD大鼠主動脈血管平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)21-22
• 2.3.2 原代血管平滑肌細(xì)胞的 α-SMA免疫熒光染色22
• 2.3.3 原代血管平滑肌細(xì)胞生長曲線的測定22
• 2.3.4 細(xì)胞計數(shù)法研究欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響22
• 2.3.5 劃痕法研究欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞遷移的影響22-23
• 2.3.6 Transwell法研究欖香烯對 100%FBS誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞遷移的影響23
• 2.3.7 統(tǒng)計學(xué)處理23
• 2.4 實驗結(jié)果23-30
• 2.4.1 原代血管平滑肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察23-24
• 2.4.2 原代血管平滑肌細(xì)胞的 α-SMA免疫熒光染色24
• 2.4.3 原代血管平滑肌細(xì)胞生長曲線的測定24-25
• 2.4.4 欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用25-27
• 2.4.5 劃痕法分析欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞遷移的抑制作用27-29
• 2.4.6 Transwell法研究欖香烯對 100%FBS誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞遷移的影響29-30
• 2.5 小結(jié)30-32
• 3 欖香烯抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的機(jī)理研究32-48
• 3.1 引言32
• 3.2 材料、試劑與儀器32-34
• 3.2.1 實驗材料32-33
• 3.2.2 實驗試劑33
• 3.2.3 實驗儀器33-34
• 3.3 實驗方法34-36
• 3.3.1 流式細(xì)胞術(shù)研究欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞周期的影響34
• 3.3.2 流式細(xì)胞術(shù)研究欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞凋亡的影響34
• 3.3.3 欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞F-actin的影響34-35
• 3.3.4 激光共聚焦顯微鏡研究欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞Ca2+的影響35
• 3.3.5 IncRNA芯片研究力學(xué)拉伸后欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響35
• 3.3.6 Weston bolt研究力學(xué)拉伸后欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)PCNA、Cx43、P53 表達(dá)情況35-36
• 3.3.7 統(tǒng)計學(xué)處理36
• 3.4 實驗結(jié)果36-46
• 3.4.1 欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞周期的影響36-38
• 3.4.2 欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞凋亡的影響38-42
• 3.4.3 欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)F-actin的影響42
• 3.4.4 欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平的影響42-43
• 3.4.5 IncRNA芯片研究力學(xué)拉伸后欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響43-44
• 3.4.6 Western blot研究力學(xué)拉伸后欖香烯對血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)PCNA、Cx43、P53 表達(dá)的影響44-46
• 3.5 小結(jié)46-48
• 4 欖香烯脂質(zhì)體涂層的制備及對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響48-60
• 4.1 引言48
• 4.2 材料、試劑與儀器48-49
• 4.2.1 實驗材料48
• 4.2.2 實驗試劑48-49
• 4.2.3 實驗儀器49
• 4.3 實驗方法49-51
• 4.3.1 欖香烯脂質(zhì)體的制備49-50
• 4.3.2 靜電電噴制備欖香烯脂質(zhì)體涂層50
• 4.3.3 欖香烯脂質(zhì)體涂層藥物釋放率檢測50-51
• 4.3.4 欖香烯脂質(zhì)體涂層對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響51
• 4.3.5 欖香烯脂質(zhì)體涂層對血管平滑肌細(xì)胞周期的影響51
• 4.3.6 統(tǒng)計學(xué)處理51
• 4.4 實驗結(jié)果51-58
• 4.4.1 掃描電鏡觀察欖香烯脂質(zhì)體涂層51-52
• 4.4.2 欖香烯脂質(zhì)體涂層的藥物釋放率52-54
• 4.4.3 欖香烯脂質(zhì)體涂層對血管平滑肌細(xì)胞生物學(xué)形態(tài)的影響54-55
• 4.4.4 欖香烯脂質(zhì)體涂層對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響55-56
• 4.4.5 欖香烯脂質(zhì)體涂層對血管平滑肌細(xì)胞周期的影響56-58
• 4.5 小結(jié)58-60
• 5 結(jié)論和展望60-63
• 5.1 主要結(jié)論60-62
• 5.2 存在的不足和后續(xù)工作建議62-63
• 致謝63-64
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 附錄68
• A. 作者在攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文：68
• B. 作者在攻讀碩士學(xué)位期間曾參與的科研項目：68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 李巍;黃嵐;;PCI術(shù)后再狹窄的病理生理及其危險因素[J];中國動脈硬化雜志;2013年04期

2 戴敬;呂樹錚;宋現(xiàn)濤;柳弘;田銳;陳欣;葛長江;周淵;苑飛;;支架再狹窄的機(jī)制及防治新進(jìn)展[J];中華老年心腦血管病雜志;2014年03期

3 張文高,邵念方,管昌益,周蘇寧,崔連群,馬學(xué)盛,江巍;中醫(yī)藥防治經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動脈成形術(shù)后再狹窄的現(xiàn)狀和思路[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2000年01期

4 周蕾;;欖香烯聯(lián)合紫杉醇脂質(zhì)體加順鉑化療治療非小細(xì)胞肺癌的療效分析[J];中國腫瘤臨床;2010年07期

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本文編號：873900