本文關(guān)鍵詞：Fgl2過表達(dá)下調(diào)PD-1的表達(dá)對自身免疫性心肌炎大鼠心功能的影響及分子機(jī)制研究

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【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诮⒋笫笞陨砻庖咝孕募⊙啄Ｐ?通過對免疫負(fù)性調(diào)控信號分子PD-1在自身免疫性心肌炎大鼠心肌中的表達(dá)情況的檢測,分析其在自身免疫性心肌炎病程發(fā)展中的意義,并以慢病毒介導(dǎo)Fgl2基因過表達(dá)進(jìn)行干預(yù),探討Fgl2作為治療自身免疫性心肌炎心肌免疫性損傷的干預(yù)靶點(diǎn)的可行性及其相關(guān)機(jī)制。方法:選擇購買SPF級雄性6-7周齡Lewis大鼠32只,隨機(jī)選取8只為正常對照組(NC組),余24只為實(shí)驗(yàn)組:以純化的豬心肌肌球蛋白(PCM)皮下注射法建立大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎模型。實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)分為3組,每組8只,即實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎組(EAM組)、Fgl2慢病毒過表達(dá)自身免疫性心肌炎組(EAM-Fgl2組)、空載體組(EAM-GFP組)。EAM-Fgl2組與EAM-GFP組大鼠于造模第1天,分別經(jīng)大鼠尾靜脈注射包裝好的Fgl2過表達(dá)慢病毒載體和等量的GFP慢病毒載體(5x107TU/只)。第40天,對各組大鼠行超聲心動(dòng)圖檢測,分別測定LVEDd、LVEDs、LVEF、LVFS等指標(biāo)。完成超聲檢測后,摘除眼球取血提取血清,用于ELISA檢測IL-17、IL-6、INF-γ炎性因子及BNP水平。處死大鼠后摘除心臟,一部分用于HE染色觀察心肌炎性程度,另一部分用于提取蛋白,Western blot檢測Fgl2、PD-1、Foxp3、RORγt蛋白表達(dá),提取心肌組織mRNA,RT-PCR檢測Fgl2、PD-1、Foxp3、RORγt的mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)明顯的心功能不全的表現(xiàn):免疫40天后,實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)弓背,呼吸頻率增快,進(jìn)食量、進(jìn)水量、活動(dòng)量均明顯減少,體重減輕。(2)心功能改變情況:超聲心動(dòng)圖檢測示,實(shí)驗(yàn)組大鼠心臟明顯擴(kuò)大,HR、LVEF、LVFS較NC組降低,其中EAM-Fgl2組降低更明顯(P0.05),提示Fgl2過表達(dá)加重心功能惡化程度。(3)心肌病理切片HE染色觀察心肌損傷程度:正常組心肌細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)未見明顯改變;實(shí)驗(yàn)組可見心肌細(xì)胞肥大,肌纖維排列紊亂,間質(zhì)水腫;EAM-Fgl2組表現(xiàn)為心肌細(xì)胞變性、壞死,間質(zhì)纖維化,可見嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤。Rezkalla法計(jì)算心肌炎性積分,EAM-Fgl2組較EAM組炎性積分增高(P0.05)。(4)血清ELISA檢測相關(guān)炎癥因子及BNP水平:與NC組比較,實(shí)驗(yàn)組大鼠血清中BNP、IL17、IL-6的表達(dá)水平增高(P0.05),其中EAM-Fgl2組與EAM組相比,BNP、IL-6及IL17明顯升高(P0.05),EAM組與EAM-GFP組無差異。(5)RT-PCR及Western blot檢測結(jié)果示:實(shí)驗(yàn)組Fgl2、RORγt、Foxp3的mRNA及蛋白表達(dá)量均較NC組增高(P0.05),PD-1的mRNA及蛋白的表達(dá)量較NC組降低,EAM-Fgl2組Fgl2過表達(dá)使Fgl2的mRNA及蛋白表達(dá)量明顯增高,PD-1的mRNA蛋白表達(dá)量則較EAM組進(jìn)一步降低(P0.05)。結(jié)論:(1)Lewis大鼠通過注射豬心肌肌球蛋白可成功誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎大鼠模型。(2)免疫性心肌炎大鼠心肌中PD-1的mRNA及蛋白表達(dá)降低。(3)慢病毒介導(dǎo)的Fgl2過表達(dá)可下調(diào)PD-1的表達(dá),上調(diào)免疫性心肌炎大鼠血清中炎癥因子的表達(dá),加重心肌炎性程度,使心功能惡化更明顯。(4)Fgl2及PD-1可能共同參與了實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎大鼠心肌炎的免疫炎性反應(yīng)過程。
【關(guān)鍵詞】：免疫性心肌炎 凝血酶原酶(Fgl2) 程序性死亡因子1(PD-1) 心功能 白介素17(IL-17)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R542.21
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮寫詞表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法12-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12
• 2.1.2 主要試劑12-13
• 2.1.3 主要儀器13-14
• 2.1.4 主要試劑配置14-15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15-21
• 2.2.1 建立動(dòng)物模型和分組15
• 2.2.2 觀察項(xiàng)目及檢測方法15-21
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21-22
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-28
• 3.1 一般情況22
• 3.2 心臟彩超心功能改變22-23
• 3.3 心肌組織病理學(xué)改變23-25
• 3.4 酶聯(lián)免疫法檢測大鼠血清炎癥因子水平25
• 3.5 熒光定量PCR檢測m RNA表達(dá)25-27
• 3.6 WESTEN BLOT檢測蛋白表達(dá)27-28
• 第4章 討論28-33
• 4.1 Fgl2過表達(dá)自身免疫性心肌炎大鼠模型的建立28-29
• 4.2 Fgl2過表達(dá)使自身免疫性心肌炎大鼠心功能降低29
• 4.3 自身免疫性心肌炎大鼠心肌中PD-1 的表達(dá)下調(diào)29-30
• 4.4 Fgl2、PD-1 在自身免疫性心肌炎中免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的探討30-33
• 第5章 結(jié)論33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述38-43
• 參考文獻(xiàn)42-43

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本文編號：857191