本文關(guān)鍵詞：束縛應(yīng)激大鼠心臟交感神經(jīng)去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與β腎上腺素受體內(nèi)化

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【摘要】：目的:應(yīng)激性心肌病(stress cardiomyopathy,SC)是由于機(jī)體對環(huán)境或精神刺激的強(qiáng)烈應(yīng)激性反應(yīng)所誘發(fā)的急性嚴(yán)重心血管不良事件,近年來受到關(guān)注。該病以心臟形態(tài)呈心尖部球性變(ballooning)為特征,可出現(xiàn)急性左心功能不全和心肌損傷標(biāo)志物水平升高等類似急性冠脈綜合征的臨床表現(xiàn)。其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚,目前認(rèn)為,其發(fā)病機(jī)制主要是交感神經(jīng)活性異常、兒茶酚胺大量釋放導(dǎo)致急性心肌損傷,其次是冠脈痙攣、微血管功能異常等。交感神經(jīng)對心功能的調(diào)控作用是通過激活心肌細(xì)胞上的β腎上腺素受體(βadrenergic receptor,β-AR)實(shí)現(xiàn)的,β-AR受體激活程度對心功能有重要影響[1,2],去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(norepinephrine transporter,NET)位于神經(jīng)突觸末梢,對調(diào)控突觸間隙中去甲腎上腺素(norepinephrine,NE)濃度和終止神經(jīng)沖動信號具有重要作用。研究觀察到,應(yīng)激后交感神經(jīng)激活導(dǎo)致心肌β-AR不同亞型表達(dá)發(fā)生不同的變化[2,3],心臟交感神經(jīng)再攝取功能也出現(xiàn)異常[4],但再攝取功能與β-AR受體表達(dá)變化的具體機(jī)制和相關(guān)關(guān)系,目前還不完全清楚。因此,本實(shí)驗(yàn)建立大鼠束縛(Immobilization,IMO)應(yīng)激性心肌病模型,通過觀察IMO前后NET與心肌β-AR亞型表達(dá)的變化,探討心臟交感神經(jīng)系統(tǒng)變化在SC發(fā)生中的作用。方法:1選取SD大鼠26只,采用急性束縛應(yīng)激建立應(yīng)激性心肌病模型(束縛組13只),設(shè)未處理者為對照組(13只)。2采用Powerlab生理記錄儀監(jiān)測大鼠心電圖和血流動力學(xué)指標(biāo)的變化,超聲心動圖觀察心臟形態(tài)變化。3采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)檢測兩組頸交感神經(jīng)節(jié)中NET,心臟中β1-AR和β2-AR的m RNA表達(dá)。4采用western blot分別檢測兩組大鼠心臟NET,β1-AR和β2-AR蛋白表達(dá)的差異。5取左心室心肌組織切片,蘇木素—伊紅染色(haematoxylin-eosin staining,HE stain)后鏡下觀察兩組大鼠心肌細(xì)胞的形態(tài)。6采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immnosorbent assay,ELISA)檢測束縛30min和2h大鼠血漿NE和肌鈣蛋白I(troponin I,cTnI)濃度。結(jié)果:1一般情況及超聲心動圖與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組大鼠體重、左室重量和心臟重量均無顯著差異(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組大鼠超聲1只可見較明顯球形形變,其余形態(tài)變化不明顯。2心電圖監(jiān)測與對照組相比,束縛固定后即可看到兩組大鼠心電圖的差異。實(shí)驗(yàn)組RR間期縮短(P0.01),心率增快(P0.01),Q波幅度加深(P0.01),R波幅度升高(P0.01),QTc間期延長(P0.01),ST段高度升高(P0.05)。3血流動力學(xué)監(jiān)測與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組左心室壓力峰值壓(Max Pressure)明顯升高(P0.01),平均壓(Mean Pressure)升高(P0.05),左心室內(nèi)壓最大上升、下降速率(±d P/dt)均增快(P0.01,P0.05)。4 RT-PCR實(shí)驗(yàn)與對照組比較,束縛組大鼠頸交感神經(jīng)節(jié)中NET m RNA表達(dá)增加(6.81倍),心臟中β1-AR m RNA表達(dá)減少(0.39倍),β2-AR m RNA表達(dá)增加(8.54倍)。5 Western blot實(shí)驗(yàn)與對照組相比,束縛實(shí)驗(yàn)組大鼠心臟交感神經(jīng)表達(dá)NET總蛋白(P0.05)和胞漿蛋白(P0.05)無明顯差異,在細(xì)胞膜蛋白中含量下降(P0.05);束縛實(shí)驗(yàn)組大鼠心臟β1-AR總蛋白(P0.05)和細(xì)胞膜中(P0.05)含量下降,而在胞漿蛋白的表達(dá)與對照組無明顯差異(P0.05)。束縛實(shí)驗(yàn)組大鼠心臟β2-AR總蛋白(P0.05)和在細(xì)胞膜中(P0.05)含量增加,而在胞漿蛋白的表達(dá)與對照組無明顯差異(P0.05)。6 HE染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),束縛組大鼠心臟出現(xiàn)炎性細(xì)胞聚集,心肌細(xì)胞水腫,壞死等心肌毒性表現(xiàn)。7 ELISA實(shí)驗(yàn)與對照組相比,束縛30min實(shí)驗(yàn)組血漿NE和cTnI水平均明顯升高(P0.05);2h血漿NE和cTnI水平仍明顯升高(P0.05)。并且,實(shí)驗(yàn)組血漿cTnI在2h時的水平明顯高于30min時(P0.05)。結(jié)論:1成功束縛應(yīng)激大鼠建立應(yīng)激性心肌病模型。2束縛應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠血漿NE和cTnI濃度升高,cTnI濃度束縛2h濃度明顯高于束縛30min水平,并且心肌組織出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤,心肌細(xì)胞水腫,壞死等表現(xiàn)。3應(yīng)激性心肌病大鼠心臟NET蛋白含量在細(xì)胞膜中下降,而總含量和在細(xì)胞漿中無明顯變化,提示NET出現(xiàn)定位變化即內(nèi)化,此種變化可導(dǎo)致NE再攝取功能異常。同時,實(shí)驗(yàn)組大鼠神經(jīng)節(jié)NET m RNA升高,可認(rèn)為是對其定位變化的代償性反應(yīng)。4應(yīng)激性心肌病大鼠心臟通過下調(diào)β1-AR蛋白在細(xì)胞膜中的表達(dá)減少心臟毒性,通過上調(diào)β2-AR蛋白在細(xì)胞膜中的表達(dá)增強(qiáng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：應(yīng)激性心肌病 大鼠 束縛應(yīng)激 去甲腎上腺素 去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 心功能 β腎上腺能受體
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R542.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-25
• 結(jié)果25-27
• 附圖27-34
• 附表34-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述 應(yīng)激與心血管疾病44-53
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 致謝53-54
• 個人簡歷54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李賀;周欣;彭朋;何冰;王得順;胡冰;鄭淑芳;;神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在應(yīng)激性心肌病發(fā)病中的潛在作用[J];生命科學(xué);2012年06期

2 ;Cardiac sympathetic nerve terminal function in congestive heart failure[J];Acta Pharmacologica Sinica;2007年07期

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本文編號：855895