本文關(guān)鍵詞：NIX在高血壓血管重塑中的生物學(xué)作用

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【摘要】：目的探討NIX在高血壓誘導(dǎo)血管重塑進(jìn)程中的表達(dá)變化、細(xì)胞分布及在血管平滑肌細(xì)胞中的作用,以發(fā)現(xiàn)高血壓誘導(dǎo)血管重塑過(guò)程中新的調(diào)控分子,為有效控制、逆轉(zhuǎn)血管重塑發(fā)生提供新的依據(jù)。方法1高血壓誘導(dǎo)血管重塑進(jìn)程中的NIX表達(dá)與細(xì)胞分布。1)采用腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)建立大鼠血管重塑模型,分為假手術(shù)組和手術(shù)組,每組8只,分別飼養(yǎng)8周。采用頸總動(dòng)脈插管檢測(cè)平均動(dòng)脈壓,采用HE染色檢測(cè)血管組織的病理改變,采用Masson檢測(cè)血管纖維化,采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)膠原和纖維連接蛋白表達(dá)水平,從而驗(yàn)證模型是否建立成功。采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)NIX的表達(dá),免疫組化對(duì)NIX的表達(dá)進(jìn)行定位,從而確定NIX在高血壓血管重塑大鼠模型中的變化和細(xì)胞分布。2)采用不同濃度的去甲腎上腺素(Norepinephrin,NE)誘導(dǎo)建立血管平滑肌細(xì)胞纖維化模型,分為0 mol/L、10-6 mol/L、10-5 mol/L、10-4 mol/L組,給予相應(yīng)濃度的NE干預(yù)原代大鼠血管平滑肌細(xì)胞24小時(shí)。通過(guò)MTT、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血管細(xì)胞增殖情況,蛋白免疫印跡達(dá)檢測(cè)膠原蛋白和纖維鏈接蛋白表達(dá)水平,從而確定模型建立是否成功。采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)NIX的表達(dá),從而確定NIX在血管平滑肌細(xì)胞纖維化過(guò)程中的變化。2 NIX在NE誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞中的生物學(xué)作用。1)應(yīng)用高表達(dá)pc DNA3-NIX質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠血管平滑肌細(xì)胞,分為Control(C)組,pc DNA3組、pc DNA3-NIX組、NE組、NE+pc DNA3組、NE+pc DNA3-NIX組,轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,加入10-5mol/LNE干預(yù)24小時(shí)。采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)NIX的轉(zhuǎn)染效果。采用MTT、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血管平滑肌細(xì)胞的增殖情況,蛋白免疫印跡檢測(cè)膠原蛋白和纖維鏈接蛋白的表達(dá),從而確定NIX高表達(dá)對(duì)NE誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞纖維化的影響。2)si RNA-NIX轉(zhuǎn)染大鼠血管平滑肌細(xì)胞,分為C組、Negative control(NC)組、si RNA組、NE組、NE+NC組、NE+si RNA組,轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,10-5mol/L NE干預(yù)24小時(shí)。采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)NIX的轉(zhuǎn)染效果。采用MTT、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,蛋白免疫印跡法檢測(cè)膠原蛋白和纖維連接蛋白的表達(dá),從而確定抑制NIX的表達(dá)對(duì)NE誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞纖維化的影響。結(jié)果1手術(shù)組大鼠的平均動(dòng)脈壓明顯高于假手術(shù)組(P0.05);HE染色結(jié)合圖像分析儀結(jié)果顯示,手術(shù)組大鼠的中膜厚度、中膜面積、中膜厚度/血管內(nèi)徑高于假手術(shù)組(P0.05)。Masson染色的結(jié)果顯示,手術(shù)之后,大鼠血管組織中膠原蛋白的蓄積增多。蛋白免疫印跡顯示血管組織中膠原蛋白和纖維鏈接蛋白的的表達(dá)顯著升高。表明高血壓血管重塑大鼠模型構(gòu)建成功。同時(shí)發(fā)現(xiàn)手術(shù)組大鼠血管組織中NIX的表達(dá)明顯高于假手術(shù)組。免疫組化的結(jié)果表明NIX的表達(dá)主要定位在血管平滑肌細(xì)胞。2 MTT、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,隨著NE濃度的升高,大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖加劇(P0.05),蛋白免疫印跡的結(jié)果表明隨著NE濃度的增加,膠原蛋白和纖維連接蛋白的表達(dá)明顯增加,表明NE誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞纖維化模型建立成功。同時(shí),蛋白免疫印跡結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著NE濃度升高,NIX的表達(dá)明顯增加。3蛋白免疫印跡結(jié)果顯示NIX高表達(dá)質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入。MTT和流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示當(dāng)NIX高表達(dá)時(shí),血管平滑肌細(xì)胞增殖加劇,同時(shí)NE誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞的增殖也得到了促進(jìn)(P0.05),蛋白免疫印跡結(jié)果顯示當(dāng)NIX高表達(dá)時(shí),膠原蛋白和纖維連接蛋白的表達(dá)水平明顯升高,且促進(jìn)了NE誘導(dǎo)下的膠原蛋白和纖維連接蛋白的表達(dá)。4蛋白免疫印跡結(jié)果顯示si RNA-NIX成功轉(zhuǎn)入。MTT和流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示當(dāng)NIX表達(dá)受到抑制是時(shí),血管平滑肌細(xì)胞增殖受到抑制,同時(shí)緩解了NE誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞的增殖(P0.05),蛋白免疫印跡結(jié)果顯示當(dāng)NIX的表達(dá)受到抑制時(shí),膠原蛋白和纖維連接蛋白的表達(dá)水平明顯下降,且NE誘導(dǎo)下的膠原蛋白和纖維連接蛋白的表達(dá)也明顯減少。結(jié)論高血壓血管重塑過(guò)程中,NIX的表達(dá)增加與血管纖維化的發(fā)生密切相關(guān)。此外,NIX在血管重塑過(guò)程中血管平滑肌細(xì)胞纖維化中起著調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：血管重塑 NIX NE 血管平滑肌細(xì)胞 纖維化
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R544.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮率表10-11
• 引言11-12
• 第1章 高血壓誘導(dǎo)血管重塑進(jìn)程中的NIX表達(dá)與細(xì)胞分布12-32
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法12-19
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備12-13
• 1.1.2 主要試劑13-14
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)方法14-19
• 1.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析19
• 1.2 結(jié)果19-27
• 1.2.1 NIX在高血壓誘導(dǎo)血管重塑大鼠模型中的表達(dá)與分布19-22
• 1.2.3 NIX在NE誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞纖維化過(guò)程中的變化22-27
• 1.3 討論27-29
• 1.4 小結(jié)29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 第2章 NIX在血管重塑中血管平滑肌細(xì)胞纖維化過(guò)程中的生物學(xué)作用32-47
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法32-36
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備32-33
• 2.1.2 主要試劑33-34
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法34-36
• 2.1.4 統(tǒng)計(jì)分析36
• 2.2 結(jié)果36-42
• 2.2.1 NIX高表達(dá)在NE誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞中的作用36-39
• 2.2.2 抑制NIX在NE誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞中的作用39-42
• 2.3 討論42-44
• 2.4 小結(jié)44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 第3章 綜述 高血壓血管重塑的研究進(jìn)展47-57
• 3.1 血流動(dòng)力學(xué)變化47-48
• 3.2 血管活性物質(zhì)48
• 3.3 內(nèi)皮損傷48-49
• 3.4 血管平滑肌細(xì)胞增生49-50
• 3.5 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的沉積50-51
• 3.6 展望51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 結(jié)論57-58
• 致謝58-59
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介59-60
• 作者簡(jiǎn)介60-61
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 汪俊元;王安才;吳明;曹曉霞;李俊;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與自發(fā)性高血壓大鼠血管重構(gòu)的關(guān)系[J];心腦血管病防治;2008年01期

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張燕;新型內(nèi)皮素受體拮抗劑對(duì)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2008年

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本文編號(hào)：842161