本文關(guān)鍵詞：鐵過載對臨床患者及小鼠免疫細胞的影響

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【摘要】：目的:探討鐵過載(iron overload,IO)對臨床患者以及小鼠免疫細胞的影響。方法:根據(jù)特點收集臨床鐵過載患者外周血,并收集正常人外周血作為對照組。用流式細胞術(shù)分析外周血CD3+T及CD4/CD8比值,CD3+CD8-IFN-γ+(Th1)細胞、CD3+CD8-IL-4+(Th2)細胞,CD3+CD8+IFN-γ+(Tc1)細胞、CD3+CD8+IL-4+(Tc2)細胞;腹腔注射右旋糖酐鐵建立小鼠鐵過載模型,用流式細胞術(shù)分析小鼠及外周血CD3+T、CD4/CD8比值及B220+B淋巴細胞比例;進一步檢測小鼠外周血Th1細胞、Th2細胞以及Tc1細胞、Tc2細胞;用流式細胞儀檢測脾臟CD8+T淋巴細胞比例以及IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B、perforin細胞因子的分泌情況,Annexin/PI標記檢測細胞的凋亡情況。免疫磁珠分選小鼠脾臟細胞得到CD8+T淋巴細胞,RT-PCR檢測CD8+T淋巴細胞的IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B、perforin、bcl-2、bax基因表達�；钚匝踉噭┖袡z測活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。結(jié)果:1.鐵過載患者淋巴細胞內(nèi)LIP水平明顯增長,CD3+T淋巴細胞ROS明顯上升,P值均0.05。2.鐵過載患者與對照組對比外周血中CD3+T淋巴細胞比例明顯下降,CD4/CD8比值則明顯上升;Th1/Th2比值以及Tc1/Tc2比值明顯下降,P值均0.05。3.脾臟鐵染色及流式細胞術(shù)檢測LIP水平均提示發(fā)生小鼠發(fā)生鐵過載。4.與對照組相比鐵過載組小鼠外周血中CD3+T淋巴細胞中ROS明顯上升,P0.05。5.與對照組相比,鐵過載組小鼠外周血淋巴細胞計數(shù)以及比例(%)明顯降低,P值均0.05,中性粒細胞比例(%)明顯上升P0.05,但絕對數(shù)計數(shù)無明顯變化。6.與對照組相比,鐵過載組小鼠外周血中CD3+T淋巴細胞比例(%)顯著下降,但CD4/CD8比值明顯上升,P值均0.05。7.與對照組相比,鐵過載組小鼠外周血Treg細胞比例(%)顯著上升,Th1/Th2比值以及Tc1/Tc2比值明顯下降,P值均0.05。8.與對照組相比,鐵過載組小鼠外周血CD3+CD8-T淋巴細胞凋亡率顯著上升;與對照組相比,鐵過載組小鼠外周血CD3+CD8+T淋巴細胞凋亡率顯著上升,P值均0.05。9鐵過載組小鼠脾臟中CD8+T淋巴細胞內(nèi)ROS水平約為對照組的1.73倍。顯著增加P0.05。10與對照組相比,鐵過載組小鼠脾臟CD8+T淋巴細胞比例(%)降低為對照組的0.52倍,P0.05。11與對照組相比,鐵過載組小鼠脾臟CD8+T淋巴細胞分泌的IFN-γ,Granzyme-B明顯降低;小鼠脾臟CD8+T淋巴細胞中IFN-γ(x10-4)基因表達Granzyme-B基因表達顯著下降,P0.05。12與對照組相比,脾臟CD8+T淋巴細胞凋亡率(%)明顯增高,P0.01;脾臟CD8+T淋巴細胞中bcl-2基因表達明顯下降,而bax基因表達(x10-2)明顯上升,P0.01。13上述鐵過載對小鼠淋巴細胞的作用可經(jīng)祛鐵以及抗氧化治療后可部分逆轉(zhuǎn)。結(jié)論鐵過載通過上調(diào)ROS影響患者及小鼠外周血淋巴細胞比例,抑制CD3+T的比例,上調(diào)CD4/CD8比值,下調(diào)Th1/Th2比值以及Tc1/Tc2比值,增加CD3+CD8-T淋巴細胞以及CD3+CD8+T淋巴細胞凋亡率,去鐵以及抗氧化治療后可部分逆轉(zhuǎn)。鐵過載可通過上調(diào)脾臟CD8+T淋巴細胞內(nèi)ROS抑制脾臟的CD8+T淋巴細胞IFN-γ,Granzyme-B基因表達,并抑制IFN-γ,Granzyme-B蛋白的分泌。另一方面,鐵過載可通過上調(diào)脾臟CD8+T淋巴細胞內(nèi)ROS誘導增加CD8+T淋巴細胞的凋亡,對凋亡基因bax起上調(diào)作用,而對bcl-2基因有抑制其表達的作用。
【關(guān)鍵詞】：鐵過載 T細胞亞群 凋亡 免疫 氧化應激
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R55
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、鐵過載對患者以及小鼠外周血淋巴細胞的作用16-29
• 1.1 對象和方法16-21
• 1.1.1 實驗材料16-19
• 1.1.2 實驗方法19-21
• 1.2 結(jié)果21-26
• 1.2.1 鐵過載患者外周血淋巴細胞的分析21
• 1.2.2 鐵過載小鼠模型的建立21-22
• 1.2.3 小鼠外周血常規(guī)計數(shù)：22-23
• 1.2.4 流式細胞術(shù)分析小鼠外周血中淋巴細胞情況23
• 1.2.5 流式細胞術(shù)分析小鼠外周血中T淋巴細胞分化情況23-24
• 1.2.6 鐵過載對小鼠外周血T淋巴細胞增殖與凋亡的影響24-25
• 1.2.7 鐵過載誘導外周血中T淋巴細胞活性氧增加25-26
• 1.3 討論26-27
• 1.4 小結(jié)27-29
• 二、鐵過載對小鼠脾臟CD8+T細胞的凋亡及分泌功能的影響29-39
• 2.1 對象和方法29-31
• 2.1.1 實驗材料29-30
• 2.1.2 實驗方法30-31
• 2.2 結(jié)果31-37
• 2.2.1 成功建立小鼠模型31-32
• 2.2.2 小鼠脾臟CD8+T淋巴細胞比例32-33
• 2.2.3 流式細胞術(shù)檢測小鼠脾臟CD8+T淋巴細胞凋亡情況33
• 2.2.4 小鼠脾臟CD8+T淋巴細胞bcl-2、bax基因的表達33-34
• 2.2.5 流式細胞術(shù)檢測小鼠脾臟CD8+T淋巴細胞的因子分泌34-35
• 2.2.6 RT-PCR檢測小鼠脾臟CD8+T淋巴細胞IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B、perforin基因的表達35-36
• 2.2.7 小鼠脾臟CD8+T淋巴細胞活性氧36-37
• 2.3 討論37-38
• 2.4 小結(jié)38-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-43
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明43-45
• 綜述 活性氧在免疫應答中的作用45-54
• 綜述參考文獻52-54
• 致謝54-55
• 個人簡歷55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 謝芳;趙明峰;朱海波;盧文藝;徐新女;肖霞;穆娟;劉鵬江;李玉明;;氧化應激對鐵過載造血干祖細胞造血功能的影響[J];中華醫(yī)學雜志;2011年46期

2 肖志堅;;鐵過載診斷與治療的中國專家共識[J];中華血液學雜志;2011年08期

3 曹惠芳,錢其軍,吳孟超,黃洪蓮,王華菁,賈隨旺,郭亞軍;bcl-2基因轉(zhuǎn)染阻斷Fas介導的Jurkat細胞凋亡[J];中華血液學雜志;1998年05期

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本文編號：840718