本文關鍵詞：過表達BRCC36蛋白對慢性壓力負荷誘導的小鼠心肌重構的影響及機制

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【摘要】：目的：探討B(tài)RCC36蛋白在慢性壓力負荷誘導的小鼠心肌肥大和纖維化中的作用及其可能作用機制。方法：1)利用商業(yè)服務構建心臟特異性過表達BRCC36的轉基因小鼠(a-MHC-BRCC36),并進行鑒定。2)轉基因動物完成后,通過在右無名動脈和左側頸總動脈之間部分縮窄主動脈弓(TAC)而誘導形成慢性壓力負荷模型,將制好的模型分為四組：野生型假手術組、野生型主動脈縮窄組、轉基因型假手術組、轉基因型主動脈縮窄組。3)模型建立8周后,檢測心肌肥厚程度；將心肌樣本做蘇木素-伊紅染色以及天狼星紅染色；采用實時定量聚合酶鏈反應(Real-time PCR)方法檢測細胞外基質結締組織生長因子(connective tissue growth factor, CTGF)、骨膜蛋白(Periostin)表達變化；Western blot檢測p-smad3、γ-H2AX、Rad51蛋白的變化情況。結果：1)通過基因鑒定、western blot、Real-time RT-PCR檢測證實在基礎狀態(tài)下BRCC36轉基因小鼠心臟組織中BRCC36蛋白表達較野生型小鼠明顯升高。2)在野生型小鼠,TAC手術組相對于假手術組在心臟重量指數(shù)、左心室重量指數(shù)、心肌細胞直徑均增加,而在BRCC36心臟過表達的轉基因的小鼠組,TAC誘導的心肌肥厚較野生型小鼠比較明顯減輕。3)天狼星紅染色結果顯示：天狼星紅染色可見野生型小鼠組TAC手術組血管周圍以及心肌間質膠原沉積明顯多于假手術組,而BRCC36轉基因小鼠組TAC誘導的心肌纖維化程度較野生型小鼠組明顯減輕。4)采用實時定量聚合酶鏈反應(Real-time PCR)檢測結果顯示：野生型小鼠TAC手術組相對于假手術組心肌組織內CTGF、Periostin mRNA的表達明顯升高(P0.05),而BRCC36轉基因的小鼠組,TAC誘導的上述細胞外基質分子表達水平低于野生型小鼠TAC手術組(P0.05)。5)Western blot分析結果顯示,在野生型小鼠,TAC手術組相對于假手術組心肌組織內p-smad3的水平顯著升高,同時伴有γ-H2AX及Rad51的表達明顯升高。與野生型TAC比較,轉基因小鼠TAC術后心肌組織內smad3的活化得到明顯抑制,同時顯著降低γ-H2AX蛋白表達水平,同時顯著增加Rad51蛋白表達(P0.05)。結論：心肌特異性過表達BRCC36可顯著改善慢性壓力負荷誘導的心肌肥厚及纖維化程度,這可能與其降低Smad3磷酸化以及促進DNA損傷修復來發(fā)揮作用有關。
【關鍵詞】：BRCC36 去泛素化 DNA損傷修復 心臟疾病
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫詞9-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 材料與方法12-22
• 2.1 實驗材料12-15
• 2.1.1 實驗對象12
• 2.1.2 儀器設備和設備12
• 2.1.3 主要試劑12-13
• 2.1.4 主要試劑配制13-15
• 2.2 方法15-22
• 2.2.1 小鼠基因鑒定15-16
• 2.2.2 蛋白定量16-17
• 2.2.3 組織脫水程序17
• 2.2.4 組織中提取蛋白17
• 2.2.5 Real Time-PCR步驟17-20
• 2.2.6 Western blot步驟20-22
• 第三章 實驗結果22-34
• 3.1 BRCC36轉基因小鼠鑒定22-24
• 3.1.1 實驗材料及方法22
• 3.1.2 實驗結果22-24
• 3.2 過表達BRCC36對慢性壓力負荷誘導的小鼠心臟肥厚的影響24-26
• 3.2.1 實驗材料及方法24
• 3.2.2 實驗結果24-26
• 3.3 過表達BRCC36對慢性壓力負荷誘導的小鼠心臟纖維化的影響26-28
• 3.3.1 老鼠心臟天狼星紅染色結果26-27
• 3.3.2 小鼠心臟組織細胞外基質mRNA表達水平的檢測27-28
• 3.4 過表達BRCC36對慢性壓力負荷誘導的小鼠心肌細胞內Smad3活化的影響28-30
• 3.5 過表達BRCC36對抗慢性壓力負荷下誘導的組織細胞損傷30-31
• 3.6 過表達BRCC36促進慢性壓力負荷下誘導的DNA損傷修復31-34
• 第四章 討論34-38
• 第五章 結論38
• 參考文獻38-42
• 綜述42-49
• 參考文獻47-49
• 致謝49-50
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄50-51

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