本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)BRCC36蛋白對慢性壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心肌重構(gòu)的影響及機(jī)制

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【摘要】：目的：探討B(tài)RCC36蛋白在慢性壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心肌肥大和纖維化中的作用及其可能作用機(jī)制。方法：1)利用商業(yè)服務(wù)構(gòu)建心臟特異性過表達(dá)BRCC36的轉(zhuǎn)基因小鼠(a-MHC-BRCC36),并進(jìn)行鑒定。2)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物完成后,通過在右無名動(dòng)脈和左側(cè)頸總動(dòng)脈之間部分縮窄主動(dòng)脈弓(TAC)而誘導(dǎo)形成慢性壓力負(fù)荷模型,將制好的模型分為四組：野生型假手術(shù)組、野生型主動(dòng)脈縮窄組、轉(zhuǎn)基因型假手術(shù)組、轉(zhuǎn)基因型主動(dòng)脈縮窄組。3)模型建立8周后,檢測心肌肥厚程度；將心肌樣本做蘇木素-伊紅染色以及天狼星紅染色；采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)方法檢測細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor, CTGF)、骨膜蛋白(Periostin)表達(dá)變化；Western blot檢測p-smad3、γ-H2AX、Rad51蛋白的變化情況。結(jié)果：1)通過基因鑒定、western blot、Real-time RT-PCR檢測證實(shí)在基礎(chǔ)狀態(tài)下BRCC36轉(zhuǎn)基因小鼠心臟組織中BRCC36蛋白表達(dá)較野生型小鼠明顯升高。2)在野生型小鼠,TAC手術(shù)組相對于假手術(shù)組在心臟重量指數(shù)、左心室重量指數(shù)、心肌細(xì)胞直徑均增加,而在BRCC36心臟過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因的小鼠組,TAC誘導(dǎo)的心肌肥厚較野生型小鼠比較明顯減輕。3)天狼星紅染色結(jié)果顯示：天狼星紅染色可見野生型小鼠組TAC手術(shù)組血管周圍以及心肌間質(zhì)膠原沉積明顯多于假手術(shù)組,而BRCC36轉(zhuǎn)基因小鼠組TAC誘導(dǎo)的心肌纖維化程度較野生型小鼠組明顯減輕。4)采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)檢測結(jié)果顯示：野生型小鼠TAC手術(shù)組相對于假手術(shù)組心肌組織內(nèi)CTGF、Periostin mRNA的表達(dá)明顯升高(P0.05),而BRCC36轉(zhuǎn)基因的小鼠組,TAC誘導(dǎo)的上述細(xì)胞外基質(zhì)分子表達(dá)水平低于野生型小鼠TAC手術(shù)組(P0.05)。5)Western blot分析結(jié)果顯示,在野生型小鼠,TAC手術(shù)組相對于假手術(shù)組心肌組織內(nèi)p-smad3的水平顯著升高,同時(shí)伴有γ-H2AX及Rad51的表達(dá)明顯升高。與野生型TAC比較,轉(zhuǎn)基因小鼠TAC術(shù)后心肌組織內(nèi)smad3的活化得到明顯抑制,同時(shí)顯著降低γ-H2AX蛋白表達(dá)水平,同時(shí)顯著增加Rad51蛋白表達(dá)(P0.05)。結(jié)論：心肌特異性過表達(dá)BRCC36可顯著改善慢性壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的心肌肥厚及纖維化程度,這可能與其降低Smad3磷酸化以及促進(jìn)DNA損傷修復(fù)來發(fā)揮作用有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：BRCC36 去泛素化 DNA損傷修復(fù) 心臟疾病
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫詞9-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 材料與方法12-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對象12
• 2.1.2 儀器設(shè)備和設(shè)備12
• 2.1.3 主要試劑12-13
• 2.1.4 主要試劑配制13-15
• 2.2 方法15-22
• 2.2.1 小鼠基因鑒定15-16
• 2.2.2 蛋白定量16-17
• 2.2.3 組織脫水程序17
• 2.2.4 組織中提取蛋白17
• 2.2.5 Real Time-PCR步驟17-20
• 2.2.6 Western blot步驟20-22
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-34
• 3.1 BRCC36轉(zhuǎn)基因小鼠鑒定22-24
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料及方法22
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-24
• 3.2 過表達(dá)BRCC36對慢性壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心臟肥厚的影響24-26
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料及方法24
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-26
• 3.3 過表達(dá)BRCC36對慢性壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心臟纖維化的影響26-28
• 3.3.1 老鼠心臟天狼星紅染色結(jié)果26-27
• 3.3.2 小鼠心臟組織細(xì)胞外基質(zhì)mRNA表達(dá)水平的檢測27-28
• 3.4 過表達(dá)BRCC36對慢性壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心肌細(xì)胞內(nèi)Smad3活化的影響28-30
• 3.5 過表達(dá)BRCC36對抗慢性壓力負(fù)荷下誘導(dǎo)的組織細(xì)胞損傷30-31
• 3.6 過表達(dá)BRCC36促進(jìn)慢性壓力負(fù)荷下誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)31-34
• 第四章 討論34-38
• 第五章 結(jié)論38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 綜述42-49
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 致謝49-50
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄50-51

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