發(fā)布時(shí)間：2017-09-11 10:45

  本文關(guān)鍵詞：CVB3感染小鼠心肌細(xì)胞及心臟成纖維細(xì)胞后病毒滴度及PD-L1與IFN-β的表達(dá)情況

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【摘要】：目的:病毒性心肌炎屬于感染性心肌疾病,可由多種病毒感染引發(fā),其中腸道病毒尤其是柯薩奇病毒B3(Coxsackie virus B3,CVB3)是引起病毒性心肌炎最常見(jiàn)的原因。CVB3引發(fā)的病毒性心肌炎主要可引起病毒直接損傷與病毒感染后引起機(jī)體免疫炎癥性損傷。病毒性心肌炎甚至可發(fā)展為擴(kuò)張性心肌病。目前治療病毒性心肌炎,臨床缺乏有效的特異的治療方法。因此對(duì)CVB3感染引起病毒性心肌炎的過(guò)程及干預(yù)辦法的研究都勢(shì)在必行。而心臟中有50%的細(xì)胞為成纖維細(xì)胞,心臟中最有功能的細(xì)胞為心肌細(xì)胞,因而有必要對(duì)CVB3感染機(jī)體后CVB3在心肌細(xì)胞及心臟成纖維細(xì)胞內(nèi)的變化情況以及這兩種細(xì)胞對(duì)CVB3刺激后的反應(yīng)情況進(jìn)行深入研究,為研究病毒性心肌炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程及有效治療提供依據(jù)。方法:(1)C57BL/6小鼠心肌細(xì)胞及心臟成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng):無(wú)菌取C57BL/6新生小鼠心臟,剪碎,經(jīng)胰酶及Ⅱ型膠原酶消化后收集細(xì)胞至6孔板中,1.5小時(shí)差速貼壁,CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。(2)小鼠心肌細(xì)胞及心臟成纖維細(xì)胞感染柯薩奇病毒后培養(yǎng)并觀察細(xì)胞病變,分別取第1天,第2天,第3天,第4天,第5天,第7天,第9天的細(xì)胞上清液。(3)收集到的細(xì)胞上清液分別用Hela細(xì)胞測(cè)定病毒滴度。(4)Trizol提取細(xì)胞總RNA:心肌細(xì)胞感染柯薩奇病毒后,分別在1天、3天、5天、7天、9天后提取細(xì)胞總RNA;心臟成纖維細(xì)胞感染柯薩奇病毒后,分別在3小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后提取細(xì)胞總RNA,未處理組作為正常細(xì)胞對(duì)照組,進(jìn)行Real Time PCR。結(jié)果:(1)小鼠心肌細(xì)胞及心臟成纖維細(xì)胞可進(jìn)行體外培養(yǎng)且生長(zhǎng)良好。(2)小鼠心肌細(xì)胞感染柯薩奇病毒后部分細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞病變,取不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞上清液,感染Hela細(xì)胞,測(cè)定到病毒滴度-lg CCID50前4天逐漸下降,第5天、7天、9天水平為0;小鼠心臟成纖維細(xì)胞感染柯薩奇病毒后少量細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞病變,取不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞上清液,感染Hela細(xì)胞,測(cè)定到病毒滴度-lg CCID50前2天逐漸下降,第3天至第9天水平為0。(3)用柯薩奇病毒感染心肌細(xì)胞后,Real Time PCR的結(jié)果顯示PD-L1的m RNA表達(dá)在1天、3天持續(xù)升高,在3天達(dá)到高峰,5天略有下降,7天、9天降至正常水平以下;IFN-β的m RNA表達(dá)在1天略有下降,在3天達(dá)到第一個(gè)高峰,5天、7天降至正常水平,9天達(dá)到最高峰。用柯薩奇病毒感染心臟成纖維細(xì)胞后,Real Time PCR的結(jié)果顯示PD-L1的m RNA表達(dá)在3小時(shí)略有下降,6小時(shí)回到正常水平,12小時(shí)、24小時(shí)逐漸升高,48小時(shí)、72小時(shí)降至正常水平;IFN-β的m RNA表達(dá)在3小時(shí)略有升高,6小時(shí)、12小時(shí)逐漸降至正常水平,24小時(shí)、48小時(shí)逐漸升高,72小時(shí)達(dá)到最高峰。結(jié)論:(1)CVB3感染早期主要破壞部分小鼠心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,對(duì)心臟成纖維細(xì)胞損傷不明顯,在體外培養(yǎng)小鼠心肌細(xì)胞及心臟成纖維細(xì)胞不增殖。(2)正常小鼠心肌細(xì)胞及心臟成纖維細(xì)胞構(gòu)成性表達(dá)PD-L1和IFN-βm RNA。(3)CVB3感染小鼠心肌細(xì)胞及心臟成纖維細(xì)胞后均可使得細(xì)胞內(nèi)的PD-L1及IFN-βm RNA的表達(dá)出現(xiàn)波動(dòng)性的變化。IFN-βm RNA在此兩種細(xì)胞中均可出現(xiàn)明顯的表達(dá)增高,在心臟成纖維細(xì)胞表達(dá)高于心肌細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：CVB3 病毒性心肌炎 細(xì)胞培養(yǎng) PD-L1 IFN-β
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R542.21
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-17
• 結(jié)果17-20
• 附圖20-23
• 附表23-25
• 討論25-28
• 結(jié)論28
• 參考文獻(xiàn)28-33
• 綜述 柯薩奇病毒致病毒性心肌炎研究綜述33-45
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 致謝45-46
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷46

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 李艷,陳曙霞,張冬青,劉晶星,謝龍山,錢富榮;抗柯注射液對(duì)柯薩奇B_3病毒感染小鼠自然殺傷細(xì)胞活性的影響[J];臨床心血管病雜志;2000年03期

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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本文編號(hào)：830229