本文關(guān)鍵詞：齊墩果酸對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制

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【摘要】：目的:探索齊墩果酸(Oleanolic acid,OA)對血管緊張素II(angiotensinII,AngII)誘導(dǎo)乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞(cardiac fibroblasts,cFs)增殖的影響,并探討可能存在的機(jī)制。方法:1、乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定:取乳小鼠,經(jīng)手術(shù)取其心臟心室,酶消化差速貼壁法培養(yǎng),特異性抗體熒光免疫法鑒別cFs。2、觀察OA對cFs增殖活性的影響:實(shí)驗分組:①正常對照組(0μm);②OA(10μm)組;③OA(20μm)組;④OA(40μm)組;⑤OA(60μm)組;⑥OA(80μm);⑦OA(100μm)組;分別于12h、24h、48h、72h、96h四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT)檢測細(xì)胞增殖情況。3、觀察AngII對cFs增殖的影響:實(shí)驗分組:①正常對照組(0mol/L);②AngII(10-5mol/L)組;③AngII(10-6 mol/L)組;④AngII(10-7 mol/L)組;⑤AngII(10-8 mol/L)組,分別于24h、48h、72h、96h采用MTT檢測細(xì)胞增殖活性情況。4、觀察OA對AngII誘導(dǎo)cFs增殖的影響:將cFs預(yù)先用AngII處理后備用,實(shí)驗分組為:①正常對照組;②AngII(10-7mol/L)組;③AngII(10-7mol/L)+OA(50μm)組;④AngII(10-7mol/L)+OA(50μm)+ZnppIX(10μm,HO-1酶活性阻斷劑),孵育36h,MTT檢測細(xì)胞增殖活性,熒光定量RT-PCR檢測①②③組細(xì)胞中Nrf2、HO-1mRNA的表達(dá)。5、有效慢病毒的篩選:實(shí)驗分組為:①正常對照組、②Nrf2干擾慢病毒組、③空病毒組,孵育96h,熒光顯色法直接觀察GPF顯色以及熒光定量RT-PCR法檢測細(xì)胞內(nèi)Nrf2表達(dá)量。6、檢測OA對AngII誘導(dǎo)經(jīng)Nrf2干擾慢病毒感染的cFs內(nèi)Nrf2、HO-1 mRNA的表達(dá):經(jīng)病毒感染后的cFs用AngII預(yù)處理備用,實(shí)驗分組:①正常對照組;②Ang II(10-7mol/L)組;③AngII(10-7mol/L)+OA(50μm)組;④OA(50μm)+AngII(10-7mol/L)+空病毒組;⑤OA(50μm)+AngII(10-7mol/L)+Nrf2干擾慢病毒組。MTT檢測細(xì)胞增殖活性情況,熒光定量RT-PCR檢測細(xì)胞內(nèi)Nrf2、HO-1的mRNA的表達(dá)量。結(jié)果:(1)10-100μm濃度的OA對正常cFs活性無明顯影響;(2)10-8、10-7、10-6、10-5mol/L濃度的AngII均可促進(jìn)cFs增殖,且存在濃度時間依賴性,在10-7mol/L濃度24h時AngII的增殖效應(yīng)最強(qiáng)。(3)OA能顯著抑制AngII誘導(dǎo)的乳小鼠cFs的增殖作用,并促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的Nrf2、HO-1mRNA量的表達(dá),當(dāng)加入ZnPPIX后OA的抑制作用顯著減弱。(4)熒光顯微鏡及定量RT-PCR檢測顯示Nrf2干擾慢病毒成功感染cFs,感染率約79%。(5)Nrf2的表達(dá)被干擾后OA抑制AngII誘導(dǎo)的cFs增殖效應(yīng)顯著減弱,細(xì)胞內(nèi)HO-1mRNA的表達(dá)量顯著減少。結(jié)論:(1)OA能抑制AngII誘導(dǎo)cFs的增殖,并促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Nrf2、HO-1mRNA的表達(dá)。(2)核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2參與了OA在cFs中HO-1mRNA的表達(dá)調(diào)控。(3)OA通過調(diào)控HO-1的表達(dá)抑制AngII誘導(dǎo)乳小鼠cFs的增殖作用。本研究顯示,OA可能通過激活乳小鼠cFs內(nèi)Nrf2的核轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)HO-1的mRNA表達(dá),從而減輕AngII誘導(dǎo)的乳小鼠cFs增殖作用。
【關(guān)鍵詞】：齊墩果酸 增殖 心肌成纖維細(xì)胞 核因子相關(guān)因子2 血紅素氧合酶-1
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-8
• 前言8-11
• 材料與方法11-24
• 結(jié)果24-38
• 討論38-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 英漢縮略詞對照表52-53
• 致謝53-54
• 核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2 對心血管的保護(hù)作用研究進(jìn)展(綜述)54-64
• 參考文獻(xiàn)59-64

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉保財;陳菁瑛;黃穎楨;趙云青;蔡淑忠;;仙草生產(chǎn)、研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢[J];福建農(nóng)業(yè)學(xué)報;2015年07期

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本文編號：805946