本文關(guān)鍵詞：IL-17A通過EphrinB2信號通路抑制小鼠心臟成纖維細(xì)胞的激活

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【摘要】：目的 心肌纖維化是心室重塑的重要病理基礎(chǔ),IL-17A參與心肌纖維化,但機(jī)制尚未闡明,EphrinB2信號通路參與腎臟的纖維化,但其是否在心肌纖維化中起作用還未見報道。我們的預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)IL-17A可以降低心臟成纖維細(xì)胞EphrinB2的表達(dá),因此,本研究旨在觀察IL-17A是否通過EphrinB2信號通路參與了心臟成纖維細(xì)胞的激活。 方法 應(yīng)用酶消化及差速貼壁法分離培養(yǎng)新生小鼠原代心臟成纖維細(xì)胞,并應(yīng)用vimentin、CD31、troponin TSM myosin抗體進(jìn)行免疫熒光染色鑒定培養(yǎng)的心臟成纖維細(xì)胞。免疫熒光法用于檢測心臟成纖維細(xì)胞EphrinB2的表達(dá)。實驗分為對照組、慢病毒陰性組、慢病毒感染組,IL-17A組,慢病毒陰性對照+IL-17A組、慢病毒感染組+IL-17A組。用CCK8及劃痕試驗檢測小鼠心臟成纖維細(xì)胞的增殖及遷移能力,實時熒光定量PCR (real-time PCR)及Western blot檢測a-SMA、I、III型膠原的表達(dá)情況。各組實驗均獨立重復(fù)3次,實驗數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(x+SE)表示,兩組樣本平均數(shù)比較時用t檢驗,多組數(shù)據(jù)間比較采用ANOVA(方差分析),應(yīng)用SPSS19.0作統(tǒng)計分析,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 體外分離培養(yǎng)的小鼠心臟成纖維細(xì)胞經(jīng)免疫熒光染色vimentin(+)、CD31(-)、 troponin T (-)、SM myosin (-),純度在95%以上,且小鼠心臟成纖維細(xì)胞大量表達(dá)EphrinB2; IL-17A (100ng/ml)處理24h后,小鼠心臟成纖維細(xì)胞的增殖遷移能力、a-SMA的表達(dá)和Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成均較對照組顯著降低。與此同時,EphrinB2表達(dá)也較對照組明顯下降；慢病毒感染沉默EphrinB2基因后,心臟成纖維細(xì)胞的增殖遷移能力、a-SMA表達(dá)及膠原合成均較對照組顯著降低,而EphrinB2基因過表達(dá)后結(jié)果則相反。EphrinB2基因沉默的心臟成纖維細(xì)胞IL-17A處理組即efnb2-shRNA+IL-17A與對照組即scramble+IL-17A組、control+IL-17A組相比,小鼠心臟成纖維細(xì)胞的增殖遷移能力、a-SMA的表達(dá)及Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成均進(jìn)一步降低。而EphrinB2過表達(dá)的心臟成纖維細(xì)胞IL-17A處理組即lenti-efnb2+IL-17A與對照組vector+IL-17A、control+IL-17A相比,逆轉(zhuǎn)了IL-17A對小鼠心臟成纖維細(xì)胞的抑制作用。 結(jié)論 IL-17A抑制體外培養(yǎng)的新生小鼠成纖維細(xì)胞的增殖遷移,同時減少了a-SMA的表達(dá)及膠原的合成,并提示IL-17A通過抑制EphrinB2信號通路而發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：心臟成纖維細(xì)胞 EphrinB2 IL-17A 肌成纖維細(xì)胞 心肌纖維化
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R542.2
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 英文縮略詞10-12
• 1 引言12-15
• 2 實驗材料15-18
• 3 實驗方法18-23
• 4 實驗分組23-28
• 5 統(tǒng)計分析28-29
• 6 實驗結(jié)果29-50
• 7 討論50-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 綜述59-78
• 參考文獻(xiàn)68-78
• 作者簡介78

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬湘一;羅丹楓;李科珍;劉榮華;劉焱;朱濤;鄧東銳;周劍峰;孟力;王世宣;馬丁;;Suppression of EphB4 Improves the Inhibitory Effect of mTOR shRNA on the Biological Behaviors of Ovarian Cancer Cells by Down-regulating Akt Phosphorylatio[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2012年03期

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本文編號：803722